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?實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Actinomyces naeslundiiPCR |
貨號 | BJP1640 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,大吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的大吸收光譜在 500nm,大發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
PCR檢測試劑盒具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 兩管式 RT-PCR,一次 RT 反應產(chǎn)物可以作為多次 PCR 的模板。本試劑盒提供 10 次的 RT 反應試劑和 50 次的 PCR 試劑。
3. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性高,引物是根據(jù)基因的保守區(qū)域設計,適用于所有強、中、弱新城疫毒株,產(chǎn)物長度為 421 bp。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
上皮中性粒細胞激活肽78(ENA78)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- ALX1 antibody37 kDa
凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- ALX3 antibody37 kDa, observed 70 kDa
趨化因子C-C-基元配體14(CCL14)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- ALY antibody27 kDa, observed 32 kDa
白介素31(IL31)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMACR/p504S antibody42 kDa
白介素19(IL19)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMBRA1 antibody140 kDa
白介素19(IL19)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMD1 antibody38 kDa or 21 kDa
白介素19(IL19)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMFR antibody73 kDa
接觸蛋白1(CNTN1)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMH antibody65-70 kD
接觸蛋白1(CNTN1)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMH antibody
多效生長因子(PTN)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMIGO2 antibody58 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMIGO3 antibody55 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- Aminoacylase 1 antibody46 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- Aminomethyltransferase antibody41 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMMECR1 antibody35 kDa, observed 45 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMN1 antibody28 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMOT antibody130 kDa
雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMOT antibody130 kDa
Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMOT antibody130 kDa
Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)anti- AMOT antibody62 kDa
內氏放線菌PCR檢測試劑盒價格0.469ug/ml0.781-50ug/ml種屬:Cryptococcus│albidus
分離基物:復合飼料
提供形式:斜面培養(yǎng)物
安全等級:1
模式菌株:no
應用領域:生產(chǎn)飼料用。
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基:CM0077
生長條件:28-30℃
存儲條件:定期移植法淺白隱球酵母
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