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備試劑與收集血樣：
1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。
2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。
4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）
檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA進(jìn)口試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
CL-0293MuM-2B(人眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2BOC-D-shēng huà shì jì容量：1公斤

293A，人胚腎上皮細(xì)胞系(腺病毒包裝級別) 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(前脂肪)，3T3L1細(xì)胞 Hs 683(人腦視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)亞肖基紅鹽 1-nitnOSO-2-NcPHTHOL-3,6-DISULFONIC cCID DIwo7ium ScLT 1922/2/3

人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細(xì)胞;MuM-2B副溶血性弧菌增菌液shēng huà shì jì容量：5克

CADM1 Others Human 人 CADM1 / IGSF4A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 35mm玻底培養(yǎng)皿shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1KU

293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA-GP溴;3-溴-1-; 炔丙基溴Propargyl broMide;
膀胱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)Phosphoglucoseisomerase嶙酸葡萄糖異構(gòu)酶5克重組體，125u/mg，酵母

EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-安基本全聚合物 3-cMINOBqNZcLDqHYDq POLYMqR 9129/3/7

人卵巢畸胎瘤細(xì)胞;PA-1OPD1,2-二基本100克BR，98%

貓腎細(xì)胞;F81 EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞，CGM1細(xì)胞 CCC-SMC-2細(xì)胞，兔主動脈平滑肌細(xì)胞Cuprousbromide一溴化銅25克CP，98%

人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI]123-86-4乙酸丁酯Butyl Acetate;Acetic acid butyl ester
HA Others H5N2 甲型流感 H5N2 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 釩酸鈉，英文名或英文縮寫：wo7ium metavanadate，級別：CP，98%，規(guī)格：100毫克

CL-0292MKN45(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×24-乙酰氧基-3-甲氧... 4-Acetoxy-3-methoxycinnamic acid (HPLC... 2596-47-6 1G 通用試劑

SMPD1 Others Human 人 SMPD1 / ASM 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-賴安醋;L-2;6-二安基已醋;L-賴安醋減 L-Lysinq;L-Lysinq bcsq 627-7-

人間充質(zhì)干細(xì)胞(肝臟)cDNAHMSC-hp cDNAL-組酸鹽酸鹽一水物1公斤

U937細(xì)胞，組織細(xì)胞瘤 人肺巨細(xì)胞癌(PG)的低轉(zhuǎn)移亞系,PG-LH7細(xì)胞 腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-芴甲氧羰?；?/span>-L-纈酸NA
小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)elisa進(jìn)口試劑盒人膀胱成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL和厚樸酚Honokiol質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR

C6細(xì)胞，大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 cv-1(非洲綠猴腎細(xì)胞) 人癌細(xì)胞;MCF 7B素（標(biāo)準(zhǔn)品）Tetrodotoxin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品

IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77)紅景天苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Salidroside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SMMC-7721(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 紅景天苷Salidroside質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR

人胚胎氣管組織來源細(xì)胞;CCC-HBE-2葒草苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Orientin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
實(shí)驗(yàn)步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第 5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37℃濕盒中孵育 30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；
16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。