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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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TRzol LS(液體樣本 RNA 提取試劑)

參  考  價(jià):1076.4 - 1388.4
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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    經(jīng)銷商

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    上海市

規(guī)格

50ml 1388.4元 15盒可售

50ml×2 1076.4元 15盒可售

更新時(shí)間:2024-06-26 11:56:22瀏覽次數(shù):156次

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產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn) 加工定制
適用領(lǐng)域 科研 貨號(hào) BJ-PJ6323
規(guī)格 50ml×2、50 次、50 次 包裝
用途 僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
TRzol LS(液體樣本 RNA 提取試劑)的相關(guān)產(chǎn)品:RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲(chǔ)存液RNAsafe 高效 RNase 滅活劑RNAlong RNA 長(zhǎng)期保存液RNase Away 即用型強(qiáng)力 RNase 滅活劑質(zhì)粒小量快速提取試劑盒高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒無(wú)內(nèi)毒素高純質(zhì)粒小量快速提取試劑盒酵母高純質(zhì)粒小量快速提取試劑盒 ( 帶 lyticase)

TRzol LS(液體樣本 RNA 提取試劑)

商品屬性:

產(chǎn)品分類

規(guī)格

貨號(hào)

核酸純化

50ml×2

BJ-PJ6323

核酸純化

50 次

BJ-PJ6323

TRzol LS(液體樣本 RNA 提取試劑) 

商品介紹:

保存條件:-20℃保存

產(chǎn)品介紹:
利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點(diǎn)將PCR產(chǎn)物定 向克隆到線性化的pBM30原核表達(dá)載體中。適用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion 和Q5等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物。引物T7和T7t可用于菌落PCR和測(cè)序 鑒定。 
產(chǎn)品特點(diǎn):
(2)只適合平末端 PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。 (6)載體具有卡那霉和新霉抗性。
(1) 連接反應(yīng)僅需 5 分鐘
(2) 只適合平末端PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。
(3) 載體采用了新的制備工藝,零背景,無(wú)需藍(lán)白斑篩選。
(4) 具有T7 啟動(dòng)子,類似于 pET30 載體,具備原核表達(dá)所需的所有調(diào)控元件。適用
于外源基因在大腸桿菌中的高水平表達(dá)。
(5) 帶 His.tag 和 S.tag 兩種純化標(biāo)簽。
(6) 具有凝血和腸激酶兩種蛋白酶酶切識(shí)別序列。
(7) 載體具有卡那霉抗性。
注意事項(xiàng):
(1)引物要求:PCR 引物 5’端不能進(jìn)行磷酸化修飾,普通商業(yè)化引物即可。上游引 物的 5’端添加 CACC 四個(gè)堿基。如果表達(dá)蛋白需 C 端帶 6His 標(biāo)簽,下游引物則需 要去掉基因本身的終止密碼子(3 個(gè)堿基)。目的蛋白的翻譯終止由 6His 標(biāo)簽的終 止密碼子TGA 來(lái)實(shí)現(xiàn)。
(2)DNA 聚合酶:選用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 擴(kuò)增。
(3)連接時(shí)間:5-15 分鐘,通常用 15 分鐘。
(4)連接溫度:室溫 (22℃-30℃),可使用 PCR 儀控溫。最佳反應(yīng)溫度為 25℃。若片段存在高 GC 等復(fù)雜結(jié)構(gòu),可在 37℃反應(yīng)。

(5)產(chǎn)物要求:為保證 PCR 產(chǎn)物完整,建議 72℃后延伸 5-10 分鐘。連接前使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物的質(zhì)量和純度,如 PCR 產(chǎn)物為非單一性條帶,目的片段一定要切膠回收。如 PCR 產(chǎn)物為單一條帶,無(wú)引物二聚體,可取 1-3?l 的 PCR 產(chǎn)物直接連接。但若擴(kuò)增模板為質(zhì)粒 DNA,應(yīng)注意質(zhì)粒的抗性。由于 pBM40 載體為卡那抗性,以氨芐抗性的模板質(zhì)粒擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物直接連接后的產(chǎn)物可涂布在卡那抗性的 LB 平板上。以卡那抗性的模板質(zhì)粒擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物應(yīng)切膠回收后再連接。
(6) 片段用量:膠回收的 DNA 片段一般使用量為 50-100ng。對(duì)照片段為 5’端帶CACC四個(gè)堿基的全長(zhǎng) EGFP 基因的平末端產(chǎn)物,表達(dá)產(chǎn)物大小為 32.6kD。
(7) 往 T7 和 T7t 引物干粉管加 100?l 滅菌水即為 5?M 濃度的引物。
操作步驟:
1.連接反應(yīng)
按下表,在一個(gè) 0.2ml PCR 管中依次加入

加完試劑后,輕輕混勻低速離心,使溶液集中在管 底。PCR 儀控溫 25℃反應(yīng) 15 分鐘,反應(yīng)結(jié)束后, 將離心管置于冰上,等待細(xì)菌轉(zhuǎn)化。如暫時(shí)不轉(zhuǎn)化, 可凍存于-20℃。

2. 轉(zhuǎn)化
(1)取 5µl 連接產(chǎn)物到 100µl 剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞中,輕輕混勻,冰浴 20-30 分鐘。
(2)42℃水浴中熱擊 30 秒鐘。
(3)立刻置于冰水浴中 2 分鐘。
(4)加入 900µl 無(wú)菌的不含抗生素的 SOC 或 LB,37℃,200rpm 振蕩培養(yǎng) 60 分鐘。
(5)4000rpm 離心 1 分鐘,去掉部分上清,保留 100µl 用移液器輕吹菌體,充分懸浮菌液,取全部菌液涂布,然后 37℃培養(yǎng)過(guò)夜(12-16 小時(shí))。
3. 陽(yáng)性克隆鑒定:
(1)菌落PCR方法鑒定陽(yáng)性克隆
A.用10?l吸頭挑選克隆至預(yù)先加有10μl無(wú)菌水或LB培養(yǎng)基的PCR管中,吹打混合。
B.在25? l PCR反應(yīng)體系中加入2μl細(xì)菌懸液為模板、5μM濃度的CMVPfor和SV40PolyArev各1μl,PCR方法鑒定陽(yáng)性克隆。B.在25?l PCR反應(yīng)體系中加入2μl細(xì)菌懸液為模板、T7和T7t各1μl,PCR方法鑒定陽(yáng)性克隆。
C.PCR擴(kuò)增條件:94℃預(yù)變性5分鐘(裂解細(xì)胞,失活核酸酶),94℃變性10 秒鐘,55℃退火10秒鐘(注:使用基因特異性引物做PCR鑒定時(shí),退火溫度則需按其最適溫度進(jìn)行調(diào)整),72℃延伸( 根據(jù)片段的大小決定延伸時(shí)間,通常每1-2分/1kb),30-35個(gè)循環(huán),72℃后延伸5分鐘。1%瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增結(jié)果,有強(qiáng)烈的明顯條帶的克隆為重組體,與插入片段大小相近(由于擴(kuò)增引物在克隆位置的兩側(cè),所以PCR擴(kuò)增出的DNA的長(zhǎng)度比插入片段大349bp)可視為陽(yáng)性克隆。菌落PCR方法鑒定重組體時(shí)一定要設(shè)立一個(gè)不加菌液的陰性對(duì)照。
(2) 限制性酶切分析陽(yáng)性克隆
pBM30為低拷貝質(zhì)粒。挑取單菌落接種于8mL含卡那的LB培養(yǎng)液中,過(guò)夜培養(yǎng),小量制備質(zhì)粒,參考pBM30圖譜,選擇合適的限制性內(nèi)切酶(NdeI,Bgl II,Kpn I,NcoI,Xho I),酶切后電泳鑒定重組質(zhì)粒。
(3) 測(cè)序:用T7和T7t對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序分析。


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組織胞漿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒

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