細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

重組狗 IL33 / Interleukin-33 / NF-HEV 蛋白

重組人 IL37 / IL1F7 / IL-1H4 蛋白

重組小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白

重組人 IL36G / IL1F9 蛋白

重組狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

重組人 IL1F6 / IL36A 蛋白

重組人 IL36B / IL1F8 蛋白

重組食蟹猴 IL-1 beta / IL1B 蛋白

重組大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (mature form)

重組小鼠 IL-1 beta

雞前脂肪細胞Inini病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周KAT3B/Ep300  轉(zhuǎn)錄接蛋白EP300抗體 規(guī)格: 0.2mlCCDC124  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體 規(guī)格: 0.2ml

Capillaria contorta捻轉(zhuǎn)毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Collagen V  Ⅴ型膠原抗體 規(guī)格: 0.1mlB2  相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Herba pogostemonis廣藿香LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Goat IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.5mlADRA1/ADRA1B/alpha 1 Adrenergic Receptor  alpha 1上素能受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Yaba Monkey Tumor Virus(YMTV)亞巴猴腫瘤病毒病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-HSP27 (Ser254)  磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格: 0.1mlNCE2  泛素結(jié)合E2F抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mycobacterium hominis人分枝桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周γ-Catenin  γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體 規(guī)格: 0.2mlIGFR3/CD16  FC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體 規(guī)格: 0.1ml

Apricot chlorotic leafroll phtoplasma杏褪綠卷葉植原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Salmonella enteritidis/SE  腸沙門氏菌抗體 0.2mlTHRA1+2  甲狀激素受體α1+α2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Eperythrozoon suis豬附紅  體（豬嗜血支原體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlTNFAIP2  瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2(TNFα-IP 2)抗體 規(guī)格: 0.2ml

Sepik Virus塞皮克病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周JWA  JWA蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1ml

Brome Mosaic Virus(BMV)雀麥草花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Intra Acrosomal Protein/SP10  子頂端體蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2mlCDKN2C/p18 INK4c  細胞周期蛋白依賴性激抑制劑2C抗體 規(guī)格: 0.2ml

Porcine Reovirus豬呼腸孤病毒RT-PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-MAP4K4(Ser631)  磷酸化絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-DDX58 (Thr170)  磷酸化DDX58抗體 規(guī)格: 0.1ml