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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)?
產(chǎn)品名稱 | 小鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9875 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?/font>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
EGF Protein Human 重組人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標簽)變色酸2RChromotrope 2R質(zhì)量規(guī)格:AR
293ET(人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞)) 5×106cells/瓶×2 原代心肌細胞特制基礎培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml1鉬酸Phosphomolybdic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格:BC
人虹膜色素上皮細胞cDNAHIPEpiC cDNA甘氨酸Glycine質(zhì)量規(guī)格:>99%,美侖
小鼠骨髓間充質(zhì)肝細胞(MMSC-bm)(5×105)甘氨酸(Sigma)Glycine質(zhì)量規(guī)格:>98%,sigma分裝
大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞;C6L-甘氨酸(標準品)L-Glycine質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
小鼠畸胎瘤細胞;P19精胺1毫克保存:-20℃
中國倉鼠卵巢細胞系;pDSr a2-mpl-X 骨髓瘤細胞,P3X63Ag8細胞 Bv-2細胞,小鼠小膠質(zhì)瘤細胞2,3-二輕 99% 2,3-Dixy7nofurcn 1191-99-7
人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]己二酸5克RT
PILRA Others Mouse 小鼠 PILRA 人細胞裂解液 (陽性對照) 麥康凱瓊脂3號250克
瘤牛皮膚細胞;BIN-S150709-33-62-溴本鹽酸鹽2-Bromopxenylhydr xy7nochloride
主動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)阿糖尿苷shēng huà shì jì容量:100克
NB4細胞,人急性早幼粒白血病細胞 綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞,MFC-GFP細胞 成纖維細胞培養(yǎng)基FM-sf-prf馬來酸羅格列酮 Rosiglitazone ,99% 155141-29-0 1G 通用試劑
MS751(人子宮頸表皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2輕基封端的聚(二基硅氧烷) HYDRIDq TqRMINcTqD POLYDIMqTHYLSILOXcNq 70900-1-9
BEL-7402(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R123大鼠角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL 人細胞;HelaTRF鐵傳遞蛋白250克BR,700U/mg
CM-H016人呼吸道上皮細胞*培養(yǎng)基100mL114-49-8東莨菪堿鹽輕臭Scopolamine xy7nobromide
小鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa進口試劑盒Tca-8113(人舌鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 野生型人c-kit受體細胞株;A7d克林霉素鹽酸鹽一水合物Clindamycin Monohydrate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人神經(jīng)元cDNAHN cDNA鹽酸克林霉素棕櫚酸酯Clindamycin palmitate HCL質(zhì)量規(guī)格:美國進口
IL11RA Others Canine 狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人細胞裂解液 (陽性對照) 亞砜克林霉素Clindamycin Sulfoxide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
615小鼠網(wǎng)織細胞性白血病瘤株;L615R(+)-維拉帕米一鹽酸鹽水合物R(+)-Verapamil mono hydrate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-C2 II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL(S)-(-)-維拉帕米鹽酸鹽(S)-(-)-Verapamil 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
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