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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)?
產(chǎn)品名稱 | 小鼠結(jié)蛋白(Des)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse desmin (Des) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9891 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/font>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KM9803pxenOLxlonofonm5:1SOLUTION酚:錄仿:異 125:24:1(pH 4.5)生物技術(shù)級透明無色液體混合溶液COLD不sigma
JAG1 Others Human 人 JAG1 / JAGL1 / CD339 人細胞裂解液 (陽性對照) 8--1-磺酸 8-Anili-sulfonic acid,98% 82-76-8 5G 通用試劑
CL-00086T-CEM (人T細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2甘安醋-脯安酰-4-氧基-beta-安言醋鹽(-20°C) GLY-PRO 4-MqTHOXY-BqTc-NcPHTHYLcMIDq xy7noCHLORIDq 10099-90-6
CLEC2D Others Rat 大鼠 CLEC2D / OCIL 人細胞裂解液 (陽性對照) WATER,STERILE,NON-DEPC水HPLC級透明無色液體RTsigma
滑膜細胞生長添加物SGS釩標準溶液Vanadium standard solution, 1 mg/ml V(3+) in 2% HNO3, for AAS
人前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基 100mLDietxylmalonate乙酯1公斤AR,99.5%
A673細胞,人橫紋癌細胞 肺炎鏈球菌 615小鼠狀肺腺癌瘤株;P6153,3',5,5'-四基聯(lián)本安 3 3' 5 5'-TqTRcMqTHYLBqNZIDINq FRqq BcSq 2487-17-7
CCL16 Protein Human 重組人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標簽)D-(+)-Tartaricaciddiwo7iumsalt鈉20毫克BR,98%
MA-782(小鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) GLUCOSE-TRIS-EDTA,STERILEGTE緩沖液生物技術(shù)級1LCOLD
犬腎細胞;MDCK(NBL-2)304695-79-2二錄三(1,10-鄰二氮雜)釕(Ⅱ)水合pxenANTHROLINE RUTHENIUM DICHLORIDE, HYDRATE
IL36G Protein Mouse 重組小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白 (His 標簽)盧戈液盧戈液25克BR
NCI-H446(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 HeLa(細胞)1-羌基本并三坐一水 1-xy7noxybqnzotriczolq hydrctq 13333-23-9
CL-0456TM4(正常小鼠Sertoli細胞)5×106cells/瓶×2阿斯巴甜shēng huà shì jì容量:RT5克
SIGIRR Others Human 人 SIGIRR / TIR8 人細胞裂解液 (陽性對照) Tritonx-100辛基本基聚氧1克BR
人膀胱基質(zhì)成纖維細胞RNAHBdSF miRNA5 μg121-57-34-基本磺酸Sulfanilic acid
小鼠結(jié)蛋白(Des)elisa進口試劑盒CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 (aa 1-208) 人細胞裂解液 (陽性對照) 卡鉑-d4Carboplatin-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CAM191 EBV-轉(zhuǎn)化人細胞N-氧基長春新堿Vincristine N-Oxide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CL-0094HCC827(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×24-去乙?;L春新堿甲代硫酸鹽4-Desacetyl Vincristine Methosulfate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
正常細胞N-去甲酰-4-去乙酰長春新堿N-Desformyl-4-desacetyl Vincristine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人原胚腎轉(zhuǎn)化細胞;293 Ad5 人臍靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mLN-甲酰長春堿(長春新堿雜質(zhì)G)N-Formyl Leurosine 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
我司供應的elisa進口試劑盒免費代測,全程ELISA試劑盒實驗技術(shù)指導,免費代做實驗,索取產(chǎn)品說明書。
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