操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人 TrkC / NTRK3 ELISA配對抗體

乙型流感 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配對抗體

甲型流感 H7N7 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配對抗體

人 SPARCL1 / SPARC-like 1 ELISA配對抗體

人 IL1RL1 / DER4 ELISA配對抗體

人 IL13RA1 / CD213a1 ELISA配對抗體

人 CD31 / PECAM-1 ELISA配對抗體

人 TNF-alpha / TNFA / TNFSF2

HMY-1（黑色素瘤細胞)Human T-cell Lymphoma Virus Provirus(HTLV-1)人類嗜T淋巴  病毒1型前病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TLR11  Toll樣受體11抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-GRB10 (Tyr67)  磷酸化生因子受體結(jié)合蛋白10抗體 規(guī)格: 0.1ml

Alcaligenes faecalis糞產(chǎn)堿桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Sigma1R  衰老相關(guān)基因8蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-human IgG/Gold  膠體金標記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.5ml

Fructus litseae蓽澄茄探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周FMDV Polyprotein (3A protein)   口蹄疫毒A型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MAPK14(Tyr323)  磷酸化p38MAPK抗體 規(guī)格: 0.1ml

Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒4型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TET1/CXXC6  Ten-eleven轉(zhuǎn)運基因1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlNRP1/CD304  神經(jīng)纖毛蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Enteropathogenic E.coli(EPEC)腸致病性大腸桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MIP4/CCL18  巨噬細胞癥蛋白18抗體 規(guī)格: 0.1mlDNase gamma  脫氧核糖核酸γ抗體 規(guī)格: 0.2ml

Semen strychni馬錢子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MRF/C11orf9  髓鞘基因調(diào)控因子抗體 規(guī)格: 0.2mlMYBBP1A/p53 activated protein 2  p53激活蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human Coronavirus(HCoV)人通用RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Avidin  兔抗親和素 規(guī)格: 1mg

Mycoplasma orale口腔支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PGF2 α  前列素F2a抗體 規(guī)格: 0.2mlalpha 2 Macroglobulin  α2巨球蛋白(α-2M)抗體 規(guī)格: 0.2ml

Colletotrichum kahawae咖啡漿果炭疽病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-KLF5(Ser275)  磷酸化KLF5抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/PE  PE標記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

Influenza Virus A N1（AIV-N1）甲型流感（）病毒N1亞型RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SFR19  剪接因子，/絲豐富19 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SATB1 (Ser47)  磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml