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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

人 REG4 / RELP / GISP CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 HVEM / TNFRSF14 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 TCN2 / Transcobalamin-II CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 Follistatin / FST ( FS288 ) CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 Frizzled-5 / FZD5 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細(xì)胞裂解液

Hela 299 (宮頸癌細(xì)胞)50g 聚乙烯聚吡咯烷酮 Polyvinylpolypyrrolidone（PVPP） 室溫干燥保存 31.2-2000 pg/mL 轉(zhuǎn)基因植物EPSPS基因核酸檢測試劑盒

25mL LDS-Sample Buffer (reducing,4X)  LDS-Sample Buffer (reducing,4X)  常溫保存 7.8-500 pg/mL 人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒

2 ug pYES4NT/C pYES4NT/C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存BCYE 瓊脂(Legionella 瓊脂)進(jìn)口、國產(chǎn)BCYE Agar(Legionella Agar)用于軍團(tuán)菌的選擇性分離培養(yǎng)(OXOID方法)250

梭菌屬測定用培養(yǎng)基 Clostridium Test Medium 250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Ribonuclease 7

250mL 考馬斯亮藍(lán)染液 Coomassie Blue G-250 Stain Solution 常溫保存

500mL Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.4.   Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.4.   常溫保存改良緩沖蛋白胨水進(jìn)口、國產(chǎn)MBPW250克李氏菌的增殖

10g 聚蔗糖 400 Ficoll PM400    室溫干燥保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Solute carrier family 12 member 1

Kovcas氏靛基質(zhì)試劑盒  5ml*2 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ezrin

2 ug pET-12a pET-12a 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

50T 傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Cholesterol

100µL 小鼠抗His標(biāo)簽單抗 Anti His-Tag Mouse MAb -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。