我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價(jià)，貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。

商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 COPZ1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 MAP1LC3B 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 FBXO8 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 GJB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 RGD1359310 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 TMEM33 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 LAMTOR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 RAB7A 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CRCP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 HAAO 基因全長(zhǎng)ORF克隆

Daudi (Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞) 丙二酸鈉培養(yǎng)基 Malonate Broth 10 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human DnaJ homolog subfamily B member 1

2 ug pBD-p53 pBD-p53 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人載脂蛋白A4(apo-A4)ELISA試劑盒

30次 miRNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) miRNA Marker -20℃保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 16

2 ug pBAD/gIII A pBAD/gIII A 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Renin receptor

阿奇檢定培養(yǎng)基 Azithromycin Test Medium 250g 46.9-3000 ng/mL 人玻連蛋白（Vitronectin）ELISA試劑盒

2 ug pGEX-2TK pGEX-2TK 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人谷氧還蛋白3(GLRX3)ELISA試劑盒

2 ug pKC1139 pKC1139 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人CXC趨化因子受體1(CXCR1/IL8Ra)ELISA試劑盒

2 ug pcDNA5 FRT pcDNA5 FRT 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1

改良HC瓊脂添加劑  1ml*5 0.312-20 ng/mL 脫氫表雄酮(Dehydroepiandrosterone)ELISA試劑盒

100U Sulfolobus DNA 聚合 IV Sulfolobus DNA Polymerase IV -20℃保存麥康凱瓊脂平板進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)MacC Agar Plate50塊大腸菌群及大腸桿菌分離

1瓶 CCC-HSF-1株 CCC-HSF-1 低溫運(yùn)輸和保存

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。