操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 STAT2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 VPS16 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 LOC687029 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 SGK1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 SLC52A3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CRLF3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PRL8A4 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 APH1A 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 POGLUT1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 MRGPRF 基因全長(zhǎng)ORF克隆

EAC (小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞)250mL MES Buffer,1.0M,pH6.0   MES Buffer,1.0M,pH6.0   常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1

200 U 限制性內(nèi)切NcoI Restriction Endonuclease -20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Placenta growth factor

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（含小倒管） Lactose Peptone Broth 10ml*20支/包 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Signal peptide, CUB and EGF-like domain-containing protein 1

2mL GTP溶液，2.5mM   31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1

100次 DNA快速連接試劑盒 Rapid DNA Ligation Kit -20℃保存

500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH2.5  Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH2.5  常溫保存

1瓶 SF767株 SF767 低溫運(yùn)輸和保存 0.312-20 ng/mL 人組蛋白乙?；D(zhuǎn)移KAT8(Histone acetyltransferase KAT8)ELISA試劑盒

50mg 異硫酸熒光素 FITC    4℃保存

2 ug pCMV-SPORT6 SNAP25 pCMV-SPORT6 SNAP25 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A

500mL PIPES Buffered Saline，5X,pH7.0  PIPES Buffered Saline，5X,pH7.0  常溫保存 0.78-50 ng/mL 人干擾素誘導(dǎo)蛋白44(p44)ELISA試劑盒

1瓶 NB-4株 NB-4 低溫運(yùn)輸和保存WORT 肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Wort Broth用于真菌,特別是酵母菌的培養(yǎng)(Merck方法)250