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實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

大鼠 TF 基因全長ORF克隆

大鼠 NET1 基因全長ORF克隆

大鼠 ARFGAP3 基因全長ORF克隆

大鼠 AK1 基因全長ORF克隆

大鼠 THTPA 基因全長ORF克隆

大鼠 EHD2 基因全長ORF克隆

大鼠 ALDH9A1 基因全長ORF克隆

大鼠 MRPL45 基因全長ORF克隆

大鼠 ENO1 基因全長ORF克隆

大鼠 PNPLA3 基因全長ORF克隆

Eca-109 (食管癌細胞)2 ug pLVX-aMHC GFP pLVX-aMHC GFP 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人巖藻糖基轉移6(FUT6)ELISA試劑盒

2 ug pCAAGS pCAAGS 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Retinoic acid receptor RXR-beta

2 ug pET-35b(+) pET-35b(+) 低溫運輸，-20℃保存大豆胨進口、國產(chǎn)Peptone From Soybean250克BR

5 mg Di-8-ANEPPS Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

250ML MES Lysis Buffer with Triton   MES Lysis Buffer with Triton   常溫保存 15.6-1000 pg/mL 鵝特定基因序列(Goose)核酸檢測試劑盒

2 ug pBlueScriptR PEX5L pBlueScriptR PEX5L 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/mL 人血管加壓素V1a受體(V1aR)ELISA試劑盒

100mL PIPES Buffer，0.5M, pH7.0  PIPES Buffer，0.5M, pH7.0  常溫保存

100次 DNA PAGE膠回收試劑盒 PAGE DNABACK 4℃保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Poly [ADP-ribose] polymerase 1

250mL Casein Blocking Buffer in TBS with azide（酪蛋白封堵劑）  Casein Blocking Buffer in TBS with azide 常溫保存

2 ug pCold TF pCold TF 低溫運輸，-20℃保存 46.9-3000 pg/mL 人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)ELISA試劑盒

PALCAM肉湯 PALCAM Broth 250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Androgen-dependent TPF1-regulating protein

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。