特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:轉(zhuǎn)基因大豆MON87708品系核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:BJP64784
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
牛耳楓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pyriproxifen產(chǎn)品別名: Ozagrel
牛黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phenthoate solution產(chǎn)品別名: 4-溴-2,6-二酚
?;蛆Z去氧膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Propanil solution產(chǎn)品別名: 2-甲基肉桂酸
牛膝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phosalone產(chǎn)品別名: 異吲哚啉鹽酸鹽
牛至(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Propargite solution產(chǎn)品別名: Atomoxetine HCl
扭肚藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Plifenat solution產(chǎn)品別名: 2,5-二氟氯苯
女貞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Plifenat solution產(chǎn)品別名: 對乙氧基
女貞子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Propamocarb產(chǎn)品別名: 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧尿苷
諾米林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cloquintocet-mexyl產(chǎn)品別名: 3-氨基-4-氟苯甲酸
糯稻根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlortoluron solution產(chǎn)品別名: 4,5-亞甲二氧基-1,2-苯二
歐當(dāng)歸內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diuron產(chǎn)品別名: 3-甲苯基硫代甲酰
歐夾竹桃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Clofentezine產(chǎn)品別名: 4-甲苯基硫代甲酰
還原型輔酶Ⅱ/磷酸酰腺嘌呤二核苷酸抗體 Tazobactam, Free acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
NIT2蛋白抗體 Carbenicillin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
神經(jīng)分化因子1抗體 Fenbendazole Sulfone 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
活化T核因子1蛋白抗體 (+)-5-trans Cloprostenol 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
谷氨酸受體1抗體 (+/-)-Cloprostenol sodium salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)
神經(jīng)元抑制蛋白抗體 (+)-Cloprostenol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
神經(jīng)發(fā)育相關(guān)調(diào)控蛋白抗體 Cephalexin Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
核因子κB抑制蛋白α抗體(IκB-α) Methyl 4-hydroxy-3-methoxycinnamate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
磷酸化核因子NF-κB p65抗體 Ethyl Ferulate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
轉(zhuǎn)基因大豆MON87708品系核酸檢測試劑盒釀酒酵母Anti-ALDH2 Antibody拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
鏈格孢屬Anti-ALDH3A2 Antibody拉丁屬名: Alternaria sp.
傳染性支氣管炎病Anti-ALDH3A1 Antibody拉丁屬名: Infectious bronchitis virus
大腸埃希菌Anti-ALDH6A1 Antibody拉丁屬名: coli
中華泰勒蟲(甘肅臨洮株-2)Anti-ALDH7A1 Antibody(原貨號PB1093)拉丁屬名: sinensis
羅斯酵母Anti-ALDOB Antibody拉丁屬名: Saccharomyces rosei (Guilliermond) Lodder et Kreger-van Rij
米氏假單胞菌Anti-ALDOA Antibody拉丁屬名: Pseudomonas migulae
糙皮側(cè)耳Anti-ALK Antibody用途: 日本菌株,食用
磚紅鐮孢Anti-Alkaline Phosphatase Antibody僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
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