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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

人 F11 / FXI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 IL2Ra / CD25 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 NTRK2 / Trk-B / TRKB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 ALK-2 / ACVR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 Podoplanin 人細(xì)胞裂解液

HPAF-II (胰腺癌細(xì)胞) 50T 犬瘟熱病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人鐵反應(yīng)元件結(jié)合蛋白2(IRE-BP 2)ELISA試劑盒

2 ug pET-48b(+) pET-48b(+) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL. 牛特定基因序列(Bovine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?

250mL Citrate Buffer（檸檬酸鹽緩沖液）,0.5M,pH5.0   Citrate Buffer,0.5M,pH5.0   常溫保存胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE)   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Trypticase Soy-Yeast Extract Agar用于單增李氏菌的分純，培養(yǎng)，可用于做7%羊血瓊脂（SN標(biāo)準(zhǔn)）250

1mg  D Actinomycin D 4℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Corticotropin

100g 硫酸銨 Ammonium Sulfate 室溫保存亮綠瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Brilliant Green Agar250克沙門氏菌分離培養(yǎng)

2 ug pBMN-IRES-GFP pBMN-IRES-GFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人松弛素(RLN3)ELISA試劑盒

200U Bsu DNA 聚合，大片段 Bsu DNA Polymerase，Large Fragment -20℃保存 0.78-50 ng/mL 人防御素5(DEF5)ELISA試劑盒

1mg 親和素 Avidin, Chicken Egg White -20℃保存 0.312-20 ng/mL 綠膿桿菌(PA)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?

酪蛋白胨大豆吐溫20培養(yǎng)基 Casein DigestSoy LecithinPolysorbate 20 Medium 250gASS 瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Antibiotic sulfonamide sensitivity-test agar用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)(WHO方法)250

200mL 電泳級(jí)丙烯酰胺溶液(干粉型) Acrylamide Solution（19:1Po`wder）,EG 常溫 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Humanin-like protein 6

50T 轉(zhuǎn)基因植物NOS基因PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Human Microtubule-associated protein tau

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。