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特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:變形桿菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法)
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:BJP63509
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
鼠B淋巴瘤系拉丁屬名: Micrococcus luteus4-羥基吲哚Human RBM26 ELISA
雜交瘤規(guī)格: 冰袋泡沫盒快遞Bradykinin Fragment 1-7Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) ELISA
抗鼠CD4單克隆注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用Bradykinin Fragment 1-5Human RBP2 ELISA
雜交瘤CD25拉丁屬名: Bacillus nealsonii氯化耐爾藍(lán)Human RBM28 ELISA
人間質(zhì)-永生化拉丁屬名: Debaryomyces hansenii var. fabryi鹽酸氨溴索Human RBM39 ELISA
人內(nèi)膜癌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用鹽酸氨溴索Human RBM4 ELISA
人卵巢癌用途: 害蟲生物防治2-巰基苯并惡唑Human RBM19 ELISA
6T-CEM(人T白血?。┯猛? 研究2-巰基苯并惡唑Human RBMS1 ELISA
人肝癌(高轉(zhuǎn))-熒光素梅標(biāo)記拉丁屬名: Polaromonas vacuolata2-巰基苯并惡唑Human RBM24(RNA Binding Motif Protein 24) ELISA
人原髓白血病-熒光素梅標(biāo)記拉丁屬名: Enterobacter aerogenes Hormaeche and Edwards磺酸銀Human RBMS2 ELISA
人前列腺癌-熒光素梅標(biāo)記拉丁屬名: Brucella sp.磺酸銀Human RBM25 ELISA
小鼠肺上皮-熒光素梅標(biāo)記拉丁屬名: Halopelagius inordinatus乙基氯化鎂Human RBM26 ELISA
變形桿菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法)L-異亮氨酸/L-異白氨酸/ L-異閃白氨基酸/L-α-氨基-β-甲基戊酸/L-IsoleucineFAM92A1 FAM92A1蛋白抗體100 ul
DL-異亮氨酸/DL-異白氨酸/ DL-2-氨基-3-甲基戊酸/DL-α-氨基-β-甲基戊酸/DL-異閃白氨基酸/DL-IsoleucineFAM98A FAM98A蛋白抗體100 ul
L-亮氨酸/L-白氨酸/L-閃白氨基酸/氨基異己酸/α-氨基-γ-甲基戊酸/α-氨基異己酸/L-2-氨基-4-甲基戊酸/L-α-氨基異丁基醋酸/L-LeucineILDR1 免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域受體1抗體100 ul
D-亮氨酸/D-白氨酸/D-2-氨基-4-甲基戊酸/(R)-2-氨基-4-甲基戊酸/D-LeucineILVBL 乙酰乳酸合成酶蛋白抗體100 ul
DL-亮氨酸/DL-白氨酸/DL-2-氨基-4-甲基戊酸/DL-LeucineBFSP2/Phakinin 晶狀體蛋白2抗體100 ul
BOC-L-亮氨酸/BOC-L-白氨酸/N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸/BOC-L-LeucineGFAP delta 膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAPδ抗體100 ul
N-乙酰-DL-亮氨酸/N-乙酰-DL-白氨酸/α-乙酰氨基異己酸/α-乙?;惣核?N-乙酰基-DL-亮氨酸/N-Acetyl-DL-LeucineNPTX2 神經(jīng)穿透素2抗體100 ul
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