細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

食蟹猴 TNFSF8 基因全長ORF克隆

食蟹猴 TNFSF14 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CD70 基因全長ORF克隆

食蟹猴 TNFSF4 基因全長ORF克隆

食蟹猴 FGF10 基因全長ORF克隆

食蟹猴 LTA 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IGFBP1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IGFBP3 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IGFBP2 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IGF1R 基因全長ORF克隆

HuT 102 (T淋巴瘤細(xì)胞)50T 鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒   低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人鉀/鈉超極化激活環(huán)核苷酸門控通道蛋白4(HCN4)ELISA試劑盒

10g 蘇木色精 Hematoxylin 室溫避光保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human RuvB-like 1

木糖-明膠培養(yǎng)基 Xylose - gelatin medium 250g 0.312-20 U/mL 人溶體相關(guān)膜蛋白3(LAMP3/CD63 antigen)ELISA試劑盒

2 ug pCYB 1 pCYB 1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Neprilysin

50T 雞痘病毒PCR檢測試劑盒   低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prominin-1

50T 氣單胞菌PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

商業(yè)無菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基   0.156-10 ng/mL 人電壓依賴性P / Q型鈣離子通道亞基α-1A（Voltage-dependent P/Q-type calcium channel subunit alpha-1AELISA試劑盒

1瓶 V79株 V79 低溫運(yùn)輸和保存

2 ug pPink LC pPink LC 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Inositol oxygenase

200次 熒光染色凋亡檢測試劑盒 Fluorescent Staining Apoptosis Detection Kit 4℃避光保存 0.312-20 ng/mL 人β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒

抗生素檢定培養(yǎng)基7號(hào) Antibiotic Agar 7 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Immunoglobulin E