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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

大鼠 EIF2S1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CAR3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 HP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 AGPAT2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PRKAG1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 ITM2A 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 BET1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 TNNI1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PRL8A2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 HMGB3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

F9 (小鼠畸胎瘤細(xì)胞/小鼠胚胎癌細(xì)胞)醇發(fā)酵管  20支 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cytochrome P450 2C9

50套 硅膠膜離心吸附柱系列（小提） Silica Spin Column for Miniprep 常溫

5mL 肝素瓊脂糖 Heparin Agarose 4℃保存 0.156-10 ng/ml 人相關(guān)抗原9(SPAG9) 抗體ELISA試劑盒

2 ug pYr-1.2-mU6-EGFP pYr-1.2-mU6-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 U/mL ELISA Kit for Human Sphingosine kinase 2

1瓶 MG-63株 MG-63 低溫運(yùn)輸和保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-10

500mL Locke’s Solution Locke’s Solution 常溫保存

2 ug pMAL-p5E pMAL-p5E 低溫運(yùn)輸，-20℃保存蛋黃軟磷脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Lecithin from egg yolk10克BR

2 ug pET-3c pET-3c 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 1.56-100 U/L ELISA Kit for Human Dihydrofolate reductase

細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基（不含瓊脂）  250g

48 T 琥珀酸脫氫測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人色胺酸羥化2(TPH2)ELISA試劑盒

100mL Bis-Tris Propane,0.2M,pH9.0   Bis-Tris Propane,0.2M,pH9.0   常溫保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。