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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

大鼠 SUMO1 基因全長ORF克隆

大鼠 LSM10 基因全長ORF克隆

大鼠 GUCA2B 基因全長ORF克隆

大鼠 NME6 基因全長ORF克隆

大鼠 TUBA1A 基因全長ORF克隆

大鼠 SERPINF1 基因全長ORF克隆

大鼠 RPL13 基因全長ORF克隆

大鼠 THRSP 基因全長ORF克隆

大鼠 LY6G6C 基因全長ORF克隆

大鼠 MYL1 基因全長ORF克隆

H4 (腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)1瓶 U27株 U27 低溫運(yùn)輸和保存革蘭氏染液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)/Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)進(jìn)口、國產(chǎn)Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)50毫升×4細(xì)菌革蘭氏染色

250mL Sodium Borate Buffer（硼酸鈉緩沖液）,0.5M,pH8.5   Sodium Borate Buffer,0.5M,pH8.5   常溫保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Serpin B5

GN增菌液顆粒 Gram Negative Enrichment Broth 250g 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Latent-transforming growth factor beta-binding protein 4

1瓶 MDA-MB-415株 MDA-MB-415 低溫運(yùn)輸和保存 78-5000 pg/mL 人鞘氨醇裂合1( SPL)ELISA試劑盒

100 μL Paclitaxel（ TAXOL ）Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管（含小倒管） Double Lactose Bile Ferment Broth 10ml*20支 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-18

10g 葡聚糖 T-40 Dextran T-40 室溫保存

10次 一管式雙鏈cDNA合成試劑盒 One-Tube ds cDNA Synthesis Kit -20℃保存 0.156-10 ng/ml 人凝血噁烷A合成(TXA synthase)ELISA試劑盒

1瓶 SW13[SW-13]株 SW13[SW-13] 低溫運(yùn)輸和保存

1.5mL miRNA尿素-PAGE上樣液,6× miRNAoN -20℃保存 0.94-60 ng/mL ELISA Kit for Human Protein ripply3

50次 一站式磁珠法全血mRNA提取試劑盒   0.312-20 ng/mL 人晶狀體蛋白αA(CRYαA)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。