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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人 PPP2R3B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 UBD 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 CALM2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 TXNL4A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 FKBP2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 C1D 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 IFITM3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 AP2B1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 C6 基因全長ORF克隆

TE-1 (食管癌細胞) 50T 牛PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/ml 人甜菜堿高半甲基轉移1ELISA試劑盒

2500mL TBE電泳液,10× TBE Buffer, 10× 常溫

V-P半固體瓊脂 Voges-Proskauer Semisolid Agar 250g蛋黃粉進口、國產Egg yolk powder250克BR

5mL 髓核生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 62.5-4000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement component 1 Q subcomponent-binding protein, mitochondrial

25U β －瓊脂糖 β－Agarase -20℃保存貝爾德-帕克瓊脂基礎進口、國產Baird Parker Agar Base250克用于菌的分離培養(yǎng)

25 mg Fluorescein-5-maleimide Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human Lysosomal alpha-glucosidase

250mL Sodium Citrate Buffer（檸檬酸鈉緩沖液），0.5M, pH6.0   Sodium Citrate Buffer，0.5M, pH6.0   常溫保存西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂進口、國產Simmons Citrate Agar250克用于腸道菌的檸檬鹽利用試驗

125mL RNase-Free TE Buffer（無RNase的TE緩沖液）,20X，pH8.0   RNase-Free TE Buffer,20X，pH8.0   常溫保存LB Lennox肉湯進口、國產LB Lennox Broth250克大腸桿菌增殖

哥倫比亞血瓊脂平板（9cm） Columbia Blood Agar 5個/包

2000 U 限制性內切ApaI Restriction Endonuclease -20℃保存麥康凱瓊脂     進口、國產Maconkey Agar用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)250

10 μg Leptomycin B（出核轉運抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Muellerian-inhibiting factor

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。