細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠 LAIR1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 BAMBI / NMA 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 Neurexophilin-1 / NXPH1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 SHP2 / PTPN11 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 IL13 / ALRH 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 GBP-2 / GBP2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 BPIFA

WI38/VA13 (SV-40Z轉化肺成纖維細胞)1瓶 U14-GFP株 U14-GFP 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human NF-kappa-B-activating protein

50T 牛結核病PCR檢測試劑盒 Bovine Tuberculosis PCR Kit 低溫運輸，-20℃保存 62.5-4000 pg/mL 人多藥耐藥蛋白3(MDR3)ELISA試劑盒

標準I號營養(yǎng)瓊脂 Standard I Nutrient Agar 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human AP-2 complex subunit beta

我妻氏培養(yǎng)基基礎 Wagstsuma Agar Base 250gNBB　培養(yǎng)基進口、國產NBB　Agar用于啤酒中厭氧菌檢測250

500U 羧肽 A( 牛胰 ) Carboxypeptidase A 4℃保存 15.6-1000 pg/mL 人前阿片黑素皮質激素(POMC)ELISA試劑盒

10mg 中性蛋白 Neutral Protease 4℃保存 31.2-2000 pg/mL 人神經細絲蛋白輕鏈多肽(NF-L)ELISA試劑盒

100U 尿酸 Uricase -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2

50T 血吸蟲PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存強化梭菌培養(yǎng)基進口、國產RCM250克梭菌的增菌培養(yǎng)和計數

10g 葡聚糖 T-70 Dextran T-70 室溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Alpha-globin transcription factor CP2

250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.5   Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.5   常溫保存

100mg 4- 甲基傘形酮 -β-D- 葡糖苷酸 4-MUG 4℃避光保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Oxyntomodulin