操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人 neuregulin 1 (NRG1) 轉(zhuǎn)錄變體HRG-beta1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 neuregulin 1 (NRG1) 轉(zhuǎn)錄變體HRG-beta1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 FCGRT 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 BRDT 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 IKBKB 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 CBL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 BRD3 基因全長ORF

RD (惡性胚胎橫紋肌瘤細胞) 堿性膽鹽瓊脂  250g 15.6-1000 pg/mL 日本血吸蟲(SJ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

制備培養(yǎng)基 Penicillinase Preparation Medium 250g 78-5000 pg/mL 人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)ELISA試劑盒

2 ug pGEM 5ZF（+） pGEM 5ZF（+） 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒

40 μl Tubulin-Tracker Red（微管紅色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.78-50 ng/mL 人乙醛脫氫(ALDH)ELISA試劑盒

2 ug pcDNA3.1/V6-His B pcDNA3.1/V6-His B 低溫運輸，-20℃保存

1瓶 Yac-1株 Yac-1 低溫運輸和保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Protein S100-A9

2 ug pSH65 pSH65 低溫運輸，-20℃保存 125-8000 pg/mL ELISA Kit for Human Suppressor of cytokine signaling 2

50T 病毒H7亞型PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 nmol/mL ELISA Kit for Human Lanosterol synthase

50T 牛白血病病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

1 管 BL21RIL大腸桿菌   0.312-20 ng/mL 空腸彎曲菌(CJ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

2 ug pLP2 pLP2 低溫運輸，-20℃保存