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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

人 GM-CSF 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽

大鼠 GDF5 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

大鼠 ACVR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 NOG / Noggin 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

小鼠 NOG / Noggin 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽

小鼠 TREM2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 ALK-3 / BMPRIA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶

MDA-MB-435 (乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5次 DAB法辛雜交試劑盒   0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Complement component C1q receptor

50T 蝦PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人ATP依賴RNA解旋DDX42(RNAHP)ELISA試劑盒

100mg 5-溴-2'-脫氧尿苷 5-Bromo-2’-Deoxyuridine -20℃保存 1.56-100 ng/mL 人表面抗原A33(Cell surface A33 antigen)ELISA試劑盒

含225mlGN增菌液均質(zhì)袋 GN Enrichment Broth 10個(gè)/包氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TTC-Sabourand’s Medium用于分離真菌，酵母菌等250

50T 霍亂弧菌PCR檢測(cè)試劑盒   低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人B受體CD22 ELISA試劑盒

250mL Maleate Buffer（馬來(lái)酸緩沖液）,0.2M,pH5.5  Maleate Buffer,0.2M,pH5.5  常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7

1瓶 HMy2.CIR株 HMy2.CIR 低溫運(yùn)輸和保存 78-5000 pg/mL 人絲聚蛋白(Filaggrin)ELISA試劑盒

20次 Southern Marker DL2000（）  氯化鎂孔雀綠肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)MM，RV Medium250克沙門(mén)氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)

2 ug pCMV-SPORT6 KIAA0372 pCMV-SPORT6 KIAA0372 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Homovanillic acid

2 ug PT2-Puro PT2-Puro 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人橋梁整合因子蛋白(BIN1) ELISA試劑盒

300µL 山羊抗人IgG(H+L)，辣根過(guò)氧化物標(biāo)記 Goat Anti-Human IgG(H+L),HRP Conjugate -20℃保存豬膽鹽進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Bile salt from pig25克BR，65%

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。