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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 GPNMB / Osteoactivin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 C7 / Complement component 7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變

A-204 (A204) (橫紋肌肉瘤細(xì)胞)DNA甲基綠瓊脂基礎(chǔ) Dnase Agar Base with Methyl Green 100 0.312-20ng/mL 人重組醛糖還原(AKR1B1)ELISA試劑盒

1瓶 D341 Med株 D341 Med 低溫運(yùn)輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-related protein 1

VTM運(yùn)送培養(yǎng)基（）  5ml×20支/盒 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Angiopoietin-2

250mL Sodium Bicarbonate Buffer（鈉緩沖液），1M，pH8.0   Sodium Bicarbonate Buffer，1M，pH8.0   常溫保存 0.312-20 ng/mL 人紅生成素(EPO)ELISA試劑盒

1瓶 Dami株 Dami 低溫運(yùn)輸和保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Angiomotin

8次 表面蛋白分離試劑盒 Bacterial Surface Protein Isolation Kit -20℃保存 0.625-40 ng/mL 人Testin蛋白(Testin)ELISA試劑盒

60µL 驢抗山羊IgG，堿性標(biāo)記 Donkey Anti-Goat IgG,AP Conjugate  -20℃保存

0.5mL 鏈霉親和素，AP標(biāo)記 Streptavidin，AP Conjugated 4℃保存，請(qǐng)勿冷凍 0.312-20 ng/mL 人光蛋白聚糖(Lumican)ELISA試劑盒

pH7.3PBS緩沖液 PBS 250g

500mL Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.0   Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.0   常溫保存 62.5-4000 pg/mL 人胱天蛋白12(Caspase-12)ELISA試劑盒

2 ug pDsRed2-Express-N1 pDsRed2-Express-N1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存OGY瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)OGY Agar用于霉菌和酵母菌分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(Merck方法)250

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。