操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 LOC100365504 基因全長ORF克隆

大鼠 RGD1310769 基因全長ORF克隆

大鼠 SFN 基因全長ORF克隆

大鼠 CDK4 基因全長ORF克隆

大鼠 SAR1A 基因全長ORF克隆

大鼠 TCEAL8 基因全長ORF克隆

大鼠 C1GALT1C1 基因全長ORF克隆

大鼠 KNG1L1 基因全長ORF克隆

大鼠 CPN1 基因全長ORF克隆

大鼠 RHOA 基因全長ORF克隆

WB-F344 (大鼠肝上皮樣干細胞)250mL Sodium Citrate Buffer（檸檬酸鈉緩沖液），0.5M, pH6.5  Sodium Citrate Buffer，0.5M, pH6.5  常溫保存 31.2-2000 pg/mL 人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒

吖啶黃素 acriflavine 3.75mg/支*5 0.78-50 ng/mL 人腫瘤壞死因子受體超家族成員5(TNFRSF5)ELISA試劑盒

2 ug pMK-SCN5A donor(310) pMK-SCN5A donor(310) 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Cholesteryl ester transfer protein

WORT瓊脂 Wort Agar 250g緩沖蛋白胨水增菌液進口、國產(chǎn)BPW250克沙門氏菌前增菌培養(yǎng)和李氏菌前增菌培養(yǎng)

50T 馬流感病毒H3N8型PCR檢測試劑盒   低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Matrix metalloproteinase-26

50次 核蛋白提取試劑盒  精葡萄糖斜面瓊脂    進口、國產(chǎn)Arginine Dextrose Agar用于霍亂弧菌的復(fù)合生化試驗（SN標準）100

500mL Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.0  Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.0  常溫保存

25g 羧甲基纖維素鈉鹽 Carboxymethylcellulose Sodium Salt 常溫保存MIO培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)MIO Medium用于動力、和鳥試驗(FDA方法)250

1mg 鈣離子載體 Calcium Ionophore A23187 室溫避光保存PABA培養(yǎng)基(真菌)進口、國產(chǎn)PABA Medium(Fungi)250克已經(jīng)磺胺類及抗生素類藥物治療的患者血液等標本培養(yǎng)

100次 免RNA提取RT-PCR試劑盒  Cell Lysate RT-PCR Mix -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Cadherin-6

1瓶 RCBBF株 RCBBF 低溫運輸和保存 0.312-20 ng/mL 人軟骨蛋白(Chondroadherin)ELISA試劑盒