細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠 PRLR / Prolactin receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 SCN3B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CANT1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細胞裂解液 (陽

CCC-SMC-1 (兔主動脈平滑肌細胞)0.25mL ATP溶液，100mM ATP Solution -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Casein kinase II subunit beta

1瓶 SK-MEL-5株 SK-MEL-5 低溫運輸和保存5號膽鹽進口、國產Bile salt  525克BR，70%

2 ug pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-C1 低溫運輸，-20℃保存

2 ug pNTAP- B pNTAP- B 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人血紅素氧合1(HO-1)ELISA試劑盒

2 ug pOTB7 NFKBIL2 pOTB7 NFKBIL2 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL 人白三烯C4合成(LTC4 synthase)ELISA試劑盒

25mL Bovine Serum Albumin Solution（BSA溶液），20mg/mL Bovine Serum Albumin Solution，20mg/mL 常溫保存 78-5000 pg/mL 人5-羥色胺受體1B(5-HT1B)ELISA試劑盒

50uL 電泳級SYBR Green I SYBR GreenⅠ, EG -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fumarate hydratase, mitochondrial

卵黃瓊脂基礎 Egg Yolk Agar Base 250g 31.2-2000 pg/mL 瘧原蟲(Pm)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

100 mg Calcein Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1.56-100 ng/mL 人α-甲基?；ˋMACR）ELISA試劑盒

250U 核酸內切 V Endonuclease V -20℃保存 3.12-200 U/L ELISA Kit for Human Agouti-related protein

100mg 膠原Ⅲ型 Collagenase Type Ⅲ 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Glycoprotein hormones alpha chain