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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

重組人 EphA7 / EHK3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

重組人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白

重組人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

重組人 FGFR2 / CD332 蛋白 (aa 400-821, His & GST 標(biāo)簽)

重組人 DCAMKL1 / DCLK1 蛋白 (aa 1-705, His & GST 標(biāo)簽

NCI-H1755(肺癌細(xì)胞)500mL Krebs-Ringer Solution [Bicarbonate Buffered; w/o Ca++]  Krebs-Ringer Solution [Bicarbonate Buffered; w/o Ca++]  常溫保存氯化鈉B肉湯基礎(chǔ)(SCPB)    進口、國產(chǎn)Sodium Chloride Polymyxin Broth Base用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)，用前應(yīng)無菌加入B（SN標(biāo)準(zhǔn)）250

5 g  蛋白去除試劑M Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ryanodine receptor 1

50T 嗜水氣單胞菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Melanoma-associated antigen C1

250mL HEPES Buffer,1M,pH7.6  HEPES Buffer,1M,pH7.6  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人蛋白激JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2)ELISA試劑盒

250mL Casein Blocking Buffer in PBS（酪蛋白封堵劑）  Casein Blocking Buffer in PBS 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Mannose-binding protein C

根瘤菌培養(yǎng)基  250g 0.94-60 ng/mL 人外基質(zhì)糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒

25mL Bovine Serum Albumin Solution（BSA溶液），1mg/mL Bovine Serum Albumin Solution，1mg/mL 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement C4-B

25g 咪唑 Imidazole 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 26

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板（9cm） Violet Red Bile Agar 10個/包結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂進口、國產(chǎn)VRBA250克用于大腸菌群的檢驗

30次 一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE套裝（低pH 緩沖液套） One-Stop Protein Native PAGE Pack 常溫保存（上樣液需要-20℃保存） 0.156-10 ng/mL 人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)蛋白2(MASP2)ELISA試劑盒

2 ug pCMV/Myc/Mito pCMV/Myc/Mito 低溫運輸，-20℃保存SE增菌液進口、國產(chǎn)Selenite Enrichment Medium250克增殖標(biāo)本中的沙門氏菌

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。