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實(shí)驗要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗對象。

人 GM-CSF 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

人 bFGF 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽 (密碼子優(yōu)化)

人 aFGF / FGF1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽 (密碼子優(yōu)化)

人 aFGF / FGF1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽 (密碼子優(yōu)化)

人 CD66e / CEACAM5 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

狗 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

人 GSTA1 基因全長ORF

SK-Hep-1 (肝癌細(xì)胞) 牛奶培養(yǎng)基  250g 0.312-20 ng/mL 人骨形態(tài)生成蛋白3B(BMP-3B)ELISA試劑盒

2 ug pGAD424 pGAD424 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人S腺苷甲硫合成同種型2(AdoMet synthase 2)ELISA試劑盒

50T 大腸桿菌0157熒光PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存新生牛血清進(jìn)口、國產(chǎn)New born calf serum200毫升BR

1瓶 A-498株 A-498 低溫運(yùn)輸和保存 0.625-40 ng/ml ELISA Kit for Human Apoptosis regulator Bcl-2

100mL RNase-free Sarkosyl溶液,10%  常溫

2 ug pAdTrack pAdTrack 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 18

支原體半流培養(yǎng)基 Mycoplasma Semi-fluid Medium 250g無鹽胰胨水發(fā)酵管進(jìn)口、國產(chǎn)無鹽胰胨水發(fā)酵管20支BR

三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品 Melamine 100mg蠟樣芽孢桿菌計數(shù)顯色培養(yǎng)基進(jìn)口、國產(chǎn)蠟樣芽孢桿菌計數(shù)顯色培養(yǎng)基250克蠟樣芽孢桿菌快速顯色分離培養(yǎng)

牛膽鹽 Bile Salt 100g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Toll-like receptor 7

5L SDS-PAGE電泳液（干粉） SDS-PAGE Running Buffer 常溫保存

500mL Carbonate Buffered Saline（鹽緩沖鹽水）,5X,pH9.5  Carbonate Buffered Saline,5X,pH9.5  常溫保存 0.78-50 ng/mL 轉(zhuǎn)基因植物TETR基因核酸檢測試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。