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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):犬細(xì)小病毒(CPV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):BJP64830
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
徐長(zhǎng)卿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): L-Theanine產(chǎn)品別名: 5-酮基-2-甲氧基苯磺酰
續(xù)斷(川續(xù)斷)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): L-Theanine產(chǎn)品別名: 4-氯苯甲酸甲酯
續(xù)斷苷A英文名稱(chēng): D-Glucuronic acid產(chǎn)品別名: 正癸基乙酸酯
續(xù)斷苷B英文名稱(chēng): L(+)-allo-Threonine產(chǎn)品別名: 齊留通
玄參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Lysine acetate產(chǎn)品別名: 2-辛炔酸甲酯
旋覆花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): L-Cystine dimethyl ester dihydrochloride產(chǎn)品別名: 氧銻
雪膽素甲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): GSK-2636771產(chǎn)品別名: 4-(4-硝基芐基)吡啶
雪膽素乙英文名稱(chēng): N-Cbz-L-threonine Benzyl Ester產(chǎn)品別名: 2-乙基咪唑
雪上一支蒿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): (+)-2-Methyl-L-serine產(chǎn)品別名: 4-甲基芐
雪上一枝蒿甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): 3,3-Diphenyl-L-alanine產(chǎn)品別名: 乙酸苯乙酯
血根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): α-Methyl-L-phenylalanine產(chǎn)品別名: 左旋氨氯地平
血竭(麒麟竭)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride產(chǎn)品別名: 8-氨基辛酸
磷酸化載脂蛋白A1抗體 Sasapyrine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
磷酸化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體 Lurasidone HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
脂肪酸酰水解酶1抗體 Lurasidone HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
外基質(zhì)蛋白FRAS1抗體 Prunetin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
富馬酸水合酶抗體 Aromadendrin(Dihydrokaempferol) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
成纖維生長(zhǎng)因子21抗體 3',4',7-Trihydroxyflavone 質(zhì)量規(guī)格:>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
核仁纖維蛋白抗體 Diclazuril 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
鐵蛋白輕鏈抗體 Metacycline HCl;Methacycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
肝核因子3抗體 Metacycline HCl;Methacycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:potency>877U per mg
犬細(xì)小病毒(CPV)核酸定性檢測(cè)試劑盒TaibaiellaAnti-P3(P12) Antibody拉丁屬名: Taibaiella smilacina gen/nov,sp/nov/""
達(dá)班湖喜鹽芽孢桿菌Anti-P4 Antibody拉丁屬名: Halobacillus dabanensis
紅球菌Anti-P4 Antibody拉丁屬名: Rhodococcus sp.
米根霉Anti-P3(P17) Antibody(原貨號(hào)PB0183)拉丁屬名: Rhizopus oryzae
葉點(diǎn)霉屬Anti-P3(P17) Antibody僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
塔賓曲霉Anti-P4 Antibody僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
矮小青霉Anti-P6(p18) Antibody拉丁屬名: Penicillium humuli
發(fā)酵畢赤酵母Anti-P6 Antibody拉丁屬名: Pichia fermentans
香菇Anti-P7 Antibody(原貨號(hào)PB0397)僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
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