細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

重組人鼻病毒 蛋白 (HRV 3C Protease)

人 HER2 / ErbB2 / CD340 ELISA配對抗體

小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B ELISA配對抗體

小鼠 IL2RG / CD132 ELISA配對抗體

人 IFNAR1 / IFNAR ELISA配對抗體

人 CD82 / KAI-1 ELISA配對抗體

人 2B4 / CD244 ELISA配對抗體

人 KLK3 / Kallikrein 3 ELISA配對抗體

人 Cystatin SN / CST1

PL45（胰腺導管腺癌細胞)White Spot Syndrome Virus(WSSV)白斑綜合癥病毒套式PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 -20℃ 一年 2-4周PLGF/PIGF (mouse, rat, pig)  胎盤生因子抗體（小鼠、大鼠、豬） 規(guī)格: 0.1ml

legionella pneumophila嗜肺軍團探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CCDC93  卷曲螺旋結構域蛋白93抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human Endogenous Retroviruses W family (HERV-W)人類內(nèi)源性逆轉錄病毒W(wǎng)家族染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 3-4周KCNN4  鈣激活鉀通道蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Paramushir病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周GPA/GYPA/CD235a  型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma zingiberis preparatum炮姜LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CPLA2 beta  胞漿型磷脂A2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Borrelia burgdorferi伯氏疏螺旋體（伯氏包柔螺旋體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP激活蛋白GAP抗體 規(guī)格: 0.1ml

Xinjiang Hemorrhagic Fever Virus(XHFV)新疆出血熱病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ADAMTS7  整合素樣金屬蛋白與凝1型-7抗體 0.1ml

Porcine Circovirus 3 (PCV-3)豬圓環(huán)病毒3型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周CD168/RHAMM  透明質(zhì)酸介導細胞游走受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

馬鈴薯源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測 50次 低溫 負20度 一年 3-4周Blood Group Antigen Precursor  型抗原前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

虎源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周IRS1  胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.2ml