細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

人 VEGFR3 / FLT4 ELISA配對抗體

人 PDGFRb / CD140b ELISA配對抗體

人 CD200 ELISA配對抗體

人 PRLR / Prolactin Receptor ELISA配對抗體

人 MMP-9 / CLG4B / MMP9 ELISA配對抗體

人 CEACAM1 / CD66a ELISA配對抗體

人 IL20RA / IL20R1 ELISA配對抗體

人 Hemopexin / HPX ELISA配對抗體

人 TrkA / NTRK1 ELISA配對抗體

人 C

CEM/C1 (急性淋巴細胞白血病細胞) 250mL Sodium Chloride Solution（氯化鈉溶液），1M  Sodium Chloride Solution，1M  常溫保存 6.25-400 ng/mL 人B型慢性淋巴白血病/淋巴瘤蛋白(BCL6B)ELISA試劑盒

250mL Anticoagulant EDTA Solution（抗凝劑EDTA） Anticoagulant EDTA Solution 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2

125mL Luminol and Oxidizing Solutions  Luminol and Oxidizing Solutions  常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人膜聯(lián)蛋白A1( Annexin A1)ELISA試劑盒

48 T 脂褐質(zhì)測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

SBG增菌液 SBG Enrichment Broth 10ml*20支/包

250mL Acetate Buffer（乙酸緩沖液），1M,pH3.5   Acetate Buffer，1M,pH3.5   常溫保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Leukotriene B4 receptor 1

TTC-沙保羅培養(yǎng)基 TTC-Sha Baoluo Medium 250g 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Hypoxia-inducible gene 2 protein

2 ug pEYFP-Tub pEYFP-Tub 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 3

10mL 鹽酸萬溶液,50mg/mL Vancomycin Hydrochloride Solution -20℃保存

50T 霍亂弧菌熒光PCR檢測試劑盒   低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Leptin receptor

2 ug pCW-Cas9 pCW-Cas9 低溫運輸，-20℃保存產(chǎn)芽孢肉湯   進口、國產(chǎn)Sporulation Broth用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)250