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實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 TLR3 / CD283 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 PTGS2 / COX2 / PGHS-2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 PRKD2 / PKD2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 TRIB2 / TRB2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 SerpinB12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

NCI-H1688 (經(jīng)典小細胞肺癌細胞) 2 ug pSIREN-DsRed-Express pSIREN-DsRed-Express 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

50%卵黃乳液 50% egg Yolk emulsion 5ml*10 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Cadherin-11

250mL Succinate Buffer（琥珀酸緩沖液）,0.2M,pH4.5  Succinate Buffer,0.2M,pH4.5  常溫保存 0.625-40 ng/mL 人β微管蛋白3(TUBB3)ELISA試劑盒

10g N- 三 ( 羥甲基 ) 甲基 TRICINE(N-Tris[Hydroxymethyl]Methylglycine) 室溫干燥保存

BSSA瓊脂培養(yǎng)基 BSSA agar medium 250g標準胎牛血清進口、國產(chǎn)Fetal bovine serum(Characterized FBS)200毫升BR

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(顆粒)  250g伊紅美蘭瓊脂平板進口、國產(chǎn)EMB Agar Plate10塊腸道革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)

50T 大腸桿菌(O139)PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 3.12-200 U/mL ELISA Kit for Human Endothelin-3

2 ug pRLuc-N2 pRLuc-N2 低溫運輸，-20℃保存

100mL AMPD Buffer，0.2M，pH8.5  AMPD Buffer，0.2M，pH8.5  常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人腎母瘤蛋白(Wilms tumor protein)ELISA試劑盒

20次 酵母化學感受態(tài)制備試劑盒（含高效轉(zhuǎn)化液） Yeast Chemical Competent Cell

Preparation Kit 常溫

50次 DNA電泳分子量標準（50-500bp） DNAMETER 4℃保存

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。