操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 NOSTRIN 基因全長ORF克隆

大鼠 BCAP31 基因全長ORF克隆

大鼠 COPS3 基因全長ORF克隆

大鼠 PRL4A1 基因全長ORF克隆

大鼠 OAT 基因全長ORF克隆

大鼠 CDKN2AIPNL 基因全長ORF克隆

大鼠 KCNA10 基因全長ORF克隆

大鼠 MYL12A 基因全長ORF克隆

大鼠 FGG 基因全長ORF克隆

大鼠 TRIP4 基因全長ORF克隆

BRL 3A (大鼠肝細胞)50次 白色念珠菌RNAout   0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cytosolic beta-glucosidase

50T 偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 23

1g α-  Chymotrypsin 4℃保存1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管進口、國產(chǎn)1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管20支BR

金黃菌顯色培養(yǎng)基 Staphylococcus Chromogenic Medium 1000(ML) 7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Beta, beta-carotene 9', 10'-oxygenase

2 ug pFBDM pFBDM 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人胃動蛋白2(GKN2)ELISA試劑盒

2 ug pCAMBIA2300 pCAMBIA2300 低溫運輸，-20℃保存胰蛋白胨大豆快綠瓊脂進口、國產(chǎn)Tryptic Soy Fast Green Agar250克濾膜細菌總數(shù)的測定和分離培養(yǎng)

20µL HRP標記的兔抗GST標簽多抗 Anti GST-Tag Rabbit PAb,HRP -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒

250mL HEPES Buffer,1M,pH6.5  HEPES Buffer,1M,pH6.5  常溫保存WORT肉湯進口、國產(chǎn)WORT Broth250克真菌和酵母菌的培養(yǎng)

250mL EDTA Solution（EDTA溶液）,0.5M,pH7.4  EDTA Solution,0.5M,pH7.4  常溫保存

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 (TSB)（顆粒）  250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human N(G), N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2

50T 小反芻獸RT-PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人無翅型MMTV整合位點家族成員2B(WNT2B)ELISA試劑盒