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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 PDGFRa / CD140a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 Layilin / LAYN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 B7-H3 / CD276 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 CD8A /

NCTC 1469 (小鼠正常肝細(xì)胞)GVPC瓊脂平板（9cm） GVPC Agar Base 10個(gè)/包 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Dystrophin

4次 大提柱式真菌DNAout Maxi Column Fungal DNAOUT 常溫（RNase A需要放-20℃保存） 0.156-10 ng/mL 人脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)ELISA試劑盒

溴甲紫蛋白胨培養(yǎng)液 Bromocresol Purple Peptone Medium 250g 0.312-20 ng/mL 人生長激素促分泌素受體(GHSR)ELISA試劑盒

1000U T7 RNA聚合 T7 RNA Polymerase -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒

2 ug SD1211- 2 SD1211- 2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

100mL Oligo（dT）再生溶液 Oligo (dT) Recharger 常溫避光保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Tubulin beta-3 chain

2 ug pIZT/V5-His/CAT pIZT/V5-His/CAT 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Adropin

1瓶 Calu-1株 Calu-1 低溫運(yùn)輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fibrinogen alpha chain

10mL Agarose Gel Loading Buffer (Alkaline，堿性上樣液)，6X   Agarose Gel Loading Buffer ，6X   常溫保存

100mg 遺傳（G418）干粉 G418 Sulfate (Geneticin) Powder 4℃避光保存 0.156-10 ng/mL 人上皮中性?；罨?8(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒

5mL 內(nèi)皮生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人β葡萄糖苷(β-glucosidase)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。