操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠 CES5 / Carboxylesterase-5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 CD34 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 RPE / RPE2-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 RPE / RPE2-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 CSF2RB / CD131 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 EPHA7 / EHK3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 TREML2 / TLT2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 CEACA

RPMI 8226 (多發(fā)性骨髓瘤外周血B淋巴細(xì)胞) 噻 Cefotaxime 1.25μg/支 0.156-10 ng/mL 人金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白9(ADAMTS9) ELISA試劑盒

25Inh.U α2巨球蛋白 α2-Macroglobulin -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 7, mitochondrial

250mg 噻唑蘭 Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide(MTT)  4℃避光保存 15.6-1000 pg/ml ELISA Kit for Human Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B

2 ug pBV 221 pBV 221 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

5%乳糖發(fā)酵管  20支 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human CD40 ligand

2mL CTP溶液，2.5mM   9.375-600 pg/mL 人氧化低密度脂蛋白受體1(Ox-LDL receptor 1)ELISA試劑盒

1 管 HB101大腸桿菌 HB101 E.coli Strain -80℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Tyrosine-protein kinase JAK3

2 ug PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-3 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

5次 隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒 Random Primer DNA Labeling Kit Series -20℃保存 3.12-200 pg/mL 血栓素A2(Thromboxane A2)ELISA試劑盒

2 ug pGenesil-1.1 SLOOA pGenesil-1.1 SLOOA 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人骨架活性調(diào)節(jié)蛋白(ARC)ELISA試劑盒

2 ug pBoBi pBoBi 低溫運(yùn)輸，-20℃保存BETA-SSA瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)BETA-SSA Agar250克鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)