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貨號(hào)	BJ-X97006

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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產(chǎn)品名稱	小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97006

商品屬性：

名稱小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞

2.組織來源：肺組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無數(shù)細(xì)支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細(xì)胞，又稱I型肺泡細(xì)胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細(xì)胞，又稱Ⅱ型肺泡細(xì)胞，分泌表面活性物質(zhì)（二棕櫚酰），以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細(xì)胞位于Ⅰ型肺泡細(xì)胞之間，數(shù)量較Ⅰ型肺泡細(xì)胞多，但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細(xì)胞小。細(xì)胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細(xì)胞核圓形，胞質(zhì)著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細(xì)胞游離而有少量微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體，有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu)，稱為嗜餓性板層小體。小體內(nèi)的主要成分為磷脂，以二棕櫚酰為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來后，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質(zhì)（surfactant）。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時(shí)肺泡縮小，表面活性物質(zhì)密度增加，表面張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時(shí)肺泡擴(kuò)張，表面活性物質(zhì)密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì)。Ⅱ型肺泡細(xì)胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能，故具有修復(fù)受損傷上皮的作用。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞采用彈性蛋白酶灌注消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M003

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組大鼠 E

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞Torque Teno Sus Virus Type 1 (TTSuV-1)豬托克特諾病毒1型（豬細(xì)環(huán)病毒1型）熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlPGGT1β 香葉烯基轉(zhuǎn)移1β抗體規(guī)格: 0.2ml

Theileria buffeli水牛泰勒蟲LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Aurora B/STK-1 有絲分裂激B抗體規(guī)格: 0.1mlphospho-PPAR alpha(Ser12) 磷酸化α型-過氧化活化增生受體抗體規(guī)格: 0.1ml

Porcine rotavirus group C豬輪狀病毒C群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Mouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1mlGlycogen synthase 1 葡萄糖合成1抗體規(guī)格: 0.2ml

Herba cynomorii鎖陽探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周SHP-1 造細(xì)胞磷酸抗體規(guī)格: 0.1mlMTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor 管緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Mycobacterium leprae麻風(fēng)分枝桿LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1mlIL-6 白介素6抗體規(guī)格: 0.1ml

Wolbachia spp.沃爾巴克氏通用探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周NGFR/p75NTR 神經(jīng)生因子受體抗體規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-horse IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml

Carp Edema Virus,CEV 鯉浮腫病毒LAMP試劑盒定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周LAP3 亮氨基肽3抗體規(guī)格: 0.2mlNDUFA9 NDUFA9蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

蝦源性成分LAMP試劑盒種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlDGAT1/Diglyceride acyltransferase 二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移抗體規(guī)格: 0.2ml

Pseudorabies Virus(PrV)偽狂犬病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Na+/K+-ATPase Alpha1 Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATPα1多肽抗體規(guī)格: 0.2mlFBXW12/FBXO35 FBXW12蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Pseudomonas syringae pv. tomato丁香假單胞桿番茄致病變種PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周SLY 2型豬鏈球菌溶素抗體規(guī)格: 1mlC17orf78 17號(hào)染色體開放閱讀框78抗體規(guī)格: 0.2ml