實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周?chē)陌ぃ瑢⑴咛シ庞跓o(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦大鼠尿道上皮細(xì)規(guī)格的詳細(xì)說(shuō)明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋?xiě)腋〖?xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

無(wú)菌 42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)用培養(yǎng)基醇鈉 96%明膠蛋白胨pUNO1-hIL18BPa

1%NaCl    D-纖維二糖醇鈉 20% w/w醇溶液玉米浸粉pUNO1-hIL18R1a

1%NaCl    D-甘露糖醇鈉 97%馬鈴薯浸出粉pUNO1-hIL18RAP

1%NaCl    明膠生化管醇鈉溶液 30 wt%醇溶液水解乳蛋白pUNO1-hIL19a

O/F 試驗(yàn)用培養(yǎng)基（HLGB）檸檬酸鉍銨 99%蛋白胨（250g）pUNO1-hIL01A

培養(yǎng)基硫酸鉍 AR,99%蛋白胨緩沖液pUNO1-hIL1B

O/F 試驗(yàn)用培養(yǎng)基硫化亞銅 85-90%，工業(yè)級(jí)RS培養(yǎng)基(RS瓊脂平板)pUNO1-hIL01F10

1%尿素瓊脂氧化亞銅 AR,95.0%酪蛋白胨pUNO1-hIL01F5

霍亂弧菌套裝生化鑒定管 17 種（SN1022）硫化銅 AR,99.0%瓊脂粉pUNO1-hIL01F6

Fraser 肉湯增菌液基礎(chǔ)亞碲酸鉀 99.5%細(xì)菌蛋白胨pUNO1-hIL01F7a

大鼠尿道上皮細(xì)規(guī)格4-溴苯酰 96%萊卡819刀片 80mm long x 8mm high x 0.25mm thick(R)-(+)-9-(2-羥基)腺嘌呤Rat Pde4b(cAMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase 4B) ELISA Kit

Rat Pde5a(cGMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase) ELISA Kit

對(duì)苯酮 97%萊卡818刀片 80mm long x 14mm high x 0.35mm 6-溴-3H-惡唑并[4，5-B]吡啶-2-酮Rat Prdx4(Peroxiredoxin-4) ELISA Kit

Rat Ghrh(Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit

芐胺 AR,99.00%Lipofectamine® MessengerMAX™ Transfection Reagent鄰苯二胺Rat C-P(C-Peptide) ELISA Kit

Rat Stab2(Stabilin-2) ELISA Kit

芐胺 CP,98.5%Yeast 酵母粉L-2-氨基酰胺鹽酸鹽Rat Vdr(Vitamin D3 receptor) ELISA Kit

Rat Ckm(Creatine kinase M-type) ELISA Kit

二二醇醚醋酸酯 98%Tryptone 胰蛋白胨COD去除劑Rat -proBNP(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit

Rat OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein) ELISA Kit

二芐胺 98%Papain 木瓜蛋白酶 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別莫沙必利Rat PDGF-C(Plaet Derived Growth Factor C) ELISA Kit

Rat Nrn1(Neuritin) ELISA Kit

二二醇二醚 98%人外周血淋巴細(xì)胞分離液 內(nèi)毒素<0.5EU 科研1，2，3，4-環(huán)烷四酸二酐（CBDA）Rat Mbp(Myelin basic protein) ELISA Kit

Rat Tpo(Thyoid Peroxidase) ELISA Kit

二醇二醚 standard for GC,≥99.5% (GC)Taq DNA 聚合酶   Promega原裝左氧氟沙星Rat S100B(S100 Calcium Binding Protein B) ELISA Kit

Rat Cartpt(Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein) ELISA Kit

二醇二醚 AR，99.5%（GC)M-mLV         反轉(zhuǎn)錄酶       高溫度下不穩(wěn)定    L-狀腺素鈉Rat PICP(C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I)chain) ELISA Kit

Rat Col2a1(Collagen alpha-1(II)chain) ELISA Kit

二醇二醚 CP ，99%AMV Reverse Transcriptase 反轉(zhuǎn)錄酶   不適合長(zhǎng)片段  活性高 穩(wěn)定殺菌滅藻劑Rat PIIINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(III)chain) ELISA Kit

Rat AQP-4(Aquaporin-4) ELISA Kit

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。