B16細胞,小鼠黑色素瘤細胞培養(yǎng)注意事項:
1.傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材。培養(yǎng)用液應(yīng)嚴格分開。
2.每天觀察細胞形態(tài),掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代。
3.如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象,應(yīng)立即采取措施,一般應(yīng)棄置污染的細胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等。
凍存和復蘇的方法:
細胞凍存前,仔細檢查細胞凍存所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:傳代細胞單層、適宜生長液、滅活小牛血清、*溶液、7.5%NaHC03溶液、0.25%*溶液、標簽用具:100ml方瓶(培養(yǎng)細胞用)、克氏瓶、紅翻帽塞、吸管(10ml、lml)、細胞凍存管、二甲基亞砜、CO2孵箱、超掙臺、倒置顯微鏡、2~8℃冰箱、-20℃冰箱、液氮罐
細胞凍存開:
1.細胞:選對數(shù)生*細胞,收集細胞24小時前換液一次。
2.計數(shù):按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液,計數(shù),令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
B16細胞,小鼠黑色素瘤細胞復蘇方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴,浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。
3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5.加入培養(yǎng)液適當稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
技術(shù)相關(guān)問答:
1. 如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,*MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。2. 何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應(yīng), 造成細胞無法存活。4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生*的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內(nèi),核糖體,是蛋白質(zhì)合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內(nèi)部的物質(zhì)運動
產(chǎn)品名稱:
產(chǎn)品庫存:現(xiàn)貨
產(chǎn)品價格:詢價
生長狀態(tài):懸浮
培養(yǎng)條件:DMEM高糖培養(yǎng)基+10%的胎牛血清+1%雙抗
來源有保障(世界*品牌),狀態(tài)且傳代次數(shù)好,經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>5×100000cells/ml,具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點,純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運輸方式:活細胞運輸(T-25 flasks)。
細胞純度:95%。
細胞來源:ATCC等。
包裝:內(nèi)層無菌自封袋,防壓泡沫盒,外層防壓保溫氣泡袋,說明書。
用途: 本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存.
相關(guān)產(chǎn)品:
人血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒
TBR1蛋白抗體 Anti-TBR1
丙氨酰tRNA合成酶2抗體 Anti-AARS2
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白10抗體 Anti-BBS10
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白5抗體 Anti-BBS1
AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體 Anti-AAK1
α-1抗胰*抗體 Anti-AACT-Alpha1
唐氏綜合征細胞粘附分子抗體 Anti-Dscam
腺苷A2A受體抗體 Anti-A2AR/Adenosine A2a receptor
8-羥基脫氧鳥苷抗體 Anti-8-OHdG/8 Hydroxyguanosine
磷酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F1抗體 Anti-phospho-E2F1(Thr433)
5-脂氧合酶抗體 Anti-5 lipoxygenase
5-羥色胺受體4抗體 Anti-5-HTR4
鈉離子通道蛋白7α/Na+ CP type VIIα抗體 Anti-SCN7A
5-羥色胺受體3抗體 Anti-5-HTR3/HTR3A
突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5抗體 Anti-Tomosyn/STXBP5
5-羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白抗體 Anti-SLC6A4/5-HTT
轉(zhuǎn)錄延伸因子NELF抗體 Anti-NELF
人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒
人紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒
人紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒
人嗜酸粒細胞趨化蛋白(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒
人鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒
人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒
人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒
人白細胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒
人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒
人XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA試劑盒
人二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)ELISA試劑盒
人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒