人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞,Acc-3細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1.傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無(wú)菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材。培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。
2.每天觀察細(xì)胞形態(tài),掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長(zhǎng)致密時(shí)即可傳代。
3.如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,應(yīng)立即采取措施,一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等。
凍存和復(fù)蘇的方法:
細(xì)胞凍存前,仔細(xì)檢查細(xì)胞凍存所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:傳代細(xì)胞單層、適宜生長(zhǎng)液、滅活小牛血清、*溶液、7.5%NaHC03溶液、0.25%*溶液、標(biāo)簽用具:100ml方瓶(培養(yǎng)細(xì)胞用)、克氏瓶、紅翻帽塞、吸管(10ml、lml)、細(xì)胞凍存管、二甲基亞砜、CO2孵箱、超掙臺(tái)、倒置顯微鏡、2~8℃冰箱、-20℃冰箱、液氮罐
細(xì)胞凍存開(kāi):
1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生*細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。
2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4.分裝:分裝入無(wú)菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見(jiàn),把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱(chēng),凍存日期,以便日后查找。
人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞,Acc-3細(xì)胞復(fù)蘇方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時(shí)因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng),盡快解凍。
3.剪開(kāi)紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺(tái)上打開(kāi)蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱(chēng):
產(chǎn)品庫(kù)存:現(xiàn)貨
產(chǎn)品價(jià)格:詢(xún)價(jià)
質(zhì)量控制:本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體檢測(cè)。
運(yùn)輸保存:采用干冰保存運(yùn)輸
用途: 本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存.
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