樣本采集1. 采集前30 min內(nèi)應(yīng)避免進(jìn)食或者飲水,可先用清水輕輕漱口。2. 取一根醫(yī)用拭子或消毒棉簽(手不要碰觸拭子部位),深入口腔,緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來(lái)回刮拭20次(不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉簽,為確保樣本量可適當(dāng)增加刮拭次數(shù)),需充分接觸口腔粘膜。3. 將拭子頭折斷在樣本管中,馬上加入拭子保存液,原則上以淹沒(méi)拭子為準(zhǔn),一般1 mL拭子保存液可以保存1~3根拭子。如果樣本為唾液則直接加入等體積的拭子保存液(或者裂解液)進(jìn)行下一步。4. 蓋緊蓋子,顛倒混勻數(shù)次,加有保存液的樣品可在室溫較長(zhǎng)時(shí)間的保存,-20℃長(zhǎng)期保存,其中基因組DNA可以保持較好的完整性。注意:建議在10 min內(nèi)完成整個(gè)拭子采集過(guò)程,最多不要超過(guò)30 min,否則提取得到的基因組DNA會(huì)產(chǎn)生較多彌散?!?樣本的消化與裂解1.如采用的是保存液保存拭子,請(qǐng)保持拭子在保存液中30 min以上,顛倒混勻5~10次,然后加入300 μL裂解液(唾液:吸取300 μL樣本加入裝有300 μL裂解液的新樣本管中),渦旋混勻20~30 s,在同一管中加入30 μL蛋白酶K,渦旋60 s混勻。2.將樣品管放置在預(yù)熱至56℃的恒溫振蕩器上,1200 rpm震蕩30 min,結(jié)束后瞬時(shí)離心?!?上機(jī)提取32位提取儀提取方法1.取出預(yù)封裝試劑板,低速瞬時(shí)離心后,小心揭去鋁膜,待用;2.32位提取儀加樣方法:從消化完畢的樣本管中吸取400 μL樣品,加入至試劑板的第1/7 列,再吸取400 μL樣品,加入至試劑板的第2/8列。3.打開(kāi)核酸提取儀,將試劑板固定在相應(yīng)的位置,并插入磁棒套,運(yùn)行程序“口腔拭子DNA提取”。4.儀器完畢后,將試劑板中第6/12列中的洗脫液轉(zhuǎn)移至新的EP管中,并做好標(biāo)記。96位提取儀提取方法1.取出預(yù)封裝試劑板,低速瞬時(shí)離心后,小心揭去鋁膜,待用;2.96位提取儀加樣方法:從消化完畢的樣本管中吸取400 μL樣品,加入至試劑板的第1板,再吸取400 μL樣品,加入至試劑板的第2板。3.打開(kāi)核酸提取儀,將試劑板固定在相應(yīng)的位置,并插入磁棒套,運(yùn)行程序“口腔拭子DNA提取”。4.儀器完畢后,將試劑板中第6板中的洗脫液轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中,并做好標(biāo)記。192位提取儀提取方法1.取出預(yù)封裝試劑板,低速瞬時(shí)離心后,小心揭去鋁膜,待用;2.192位提取儀加樣方法:從消化完畢的樣本管中吸取500 μL樣品,加入至試劑板的第1板。3.打開(kāi)核酸提取儀,將試劑板固定在相應(yīng)的位置,并插入磁棒套,運(yùn)行程序“唾液&拭子”。4.儀器完畢后,將試劑板中第5板中的洗脫液轉(zhuǎn)移至新的EP管中,并做好標(biāo)記。