公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱：人膀胱癌細(xì)胞
產(chǎn)品英文代號(hào)：5637
細(xì)胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S 
生長狀態(tài)：貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格：1×106
單位：T25/瓶
是否提供細(xì)胞STR鑒定：提供STR鑒定報(bào)告
保存培養(yǎng)溫度（℃）：37
運(yùn)輸溫度（℃）：常溫
運(yùn)費(fèi)基數(shù)：活細(xì)胞包郵/凍存100-400元干冰費(fèi)
穩(wěn)定貨期（是or否）：     是

細(xì)胞培養(yǎng)及傳代：
<1>細(xì)胞培養(yǎng)
細(xì)胞請(qǐng)于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，大部分細(xì)胞是37℃，5% CO2，濕度環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不*，請(qǐng)仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書，使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件；
細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng)，加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基（一般液面高度2-3mm即可）。
<2>細(xì)胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時(shí)即可傳代，先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄；
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動(dòng)皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
加入1mL胰酶，輕輕晃動(dòng)皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；
3min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞不再貼壁，即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻；
若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
將細(xì)胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
部分細(xì)胞在傳代后時(shí)，會(huì)有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時(shí)，可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式，不要頻繁換液，大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
細(xì)胞碎片較多、背景較臟時(shí)，貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細(xì)胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代。傳代后，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基，會(huì)有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時(shí)候，可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
請(qǐng)不要隨意更換培養(yǎng)基，因?qū)嶒?yàn)需要，可以逐步馴化。
懸浮傳代：混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗一次。

細(xì)胞凍存步驟： 
   待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟：    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象

大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)lectin基因LAMP試劑盒
大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)lectin基因PCR試劑盒
大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)lectin基因染料法PCR試劑盒
大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)lectin基因探針法PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gamma-hordein基因LAMP試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gamma-hordein基因PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gamma-hordein基因染料法PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gamma-hordein基因探針法PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)HvPKABA1基因LAMP試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)HvPKABA1基因PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)HvPKABA1基因染料法PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)HvPKABA1基因探針法PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因LAMP試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因染料法PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因探針法PCR試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因LAMP試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因染料法PCR試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因探針法PCR試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因LAMP試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因PCR試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因染料法PCR試劑盒
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因探針法PCR試劑盒
馬鈴薯內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因LAMP試劑盒
馬鈴薯內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因PCR試劑盒
馬鈴薯內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因染料法PCR試劑盒

phospho-AKT1 (Tyr474) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體  0.1ml
phospho-AKT1 (Ser473 + Tyr474) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體  0.1ml
ASH1L 英文名稱： ASH1L蛋白抗體  0.2ml
ADRA2C 英文名稱： α2C-AR腎上腺素能受體抗體  0.2ml
AZI1 英文名稱： 中心體蛋白AZI1抗體  0.2ml
ALPK3 英文名稱： α蛋白激酶3抗體（心?。? 0.2ml
ALOXE3 英文名稱： 表皮型脂氧合酶3抗體（魚鱗病相關(guān)蛋白）  0.2ml
ANKRD28 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)域28抗體  0.2ml
AFF4 英文名稱： 淋巴細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體  0.2ml
ANKRD12 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體  0.2ml
ANKRD13A 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體  0.2ml
ANKRD9 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體  0.2ml
ANKS1A 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白1A抗體  0.2ml
APM2 英文名稱： 脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體  0.2ml
APOL3 英文名稱： 載脂蛋白L3抗體  0.2ml
人膀胱癌細(xì)胞說明書ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 英文名稱： /抗原81抗體  0.2ml
ATXN7L2 英文名稱： 共濟(jì)失調(diào)蛋白7樣2抗體  0.2ml
ARS2 英文名稱： 耐藥蛋白ARS2抗體  0.2ml
ARSA 英文名稱： 芳香基硫酸酯酶1抗體  0.2ml
ASNA1 英文名稱：轉(zhuǎn)運(yùn)三磷酸腺苷酶抗體  0.2ml
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線。