分子間相互作用測量儀MST
德國Nano Temper --- 分子間相互作用測量儀MST
快速、無需固定、低樣品量、天然溶液、高靈敏度
技術優(yōu)勢：
- 快速：在10分鐘之類測量解離常數
- 高靈敏范圍：從離子和片段結合到復合物間作用
- 天然的環(huán)境條件：直接在血清和裂解液中測量
- 樣品使用量低：pM的濃度下只需<4ul樣品量
- 溶液測量：不需要固定到固相表面
- 動力學范圍：亞-nM和mM的解離常數
- 極低消耗費、無維護費、簡單易操作
實驗流程：很簡單的實驗方法，避免了昂貴的樣品消耗和繁瑣的制備過程。相對于其他的已有的測量分子間相互作用的技術，MST結合毛細管使用大大降低所需的實驗成本，并且可以測量天然狀態(tài)環(huán)境中的生物分子間的相互作用。熒光分子的濃度的保持不變而結合分子的濃度梯度增加。一個4ul的樣品量被填充在MST毛細血管，然后使用制造一個局部溫度梯度。由于標記分子在玻璃毛細管中的運動導致的區(qū)域熒光強度變化就會被觀測到。既可用標簽/螢光蛋白來發(fā)光(NT.115系統(tǒng))，也可以用*自發(fā)熒光來檢測(NT.LabelFree系統(tǒng))。熒光分子或顆粒初是自由均勻分布的。在紅外激光照射下，分子收到熱泳動的作用力，而移出加熱區(qū)域，后分子在熱泳動作用力和質量擴散作用力下達到平衡，形成穩(wěn)定態(tài)。在關閉激光后，分子擴散重建均勻分布狀態(tài)。下圖顯示了該過程。
- 使用熒光染料/熒光蛋白具有良好的選擇性
- 不需要固定，在生物溶液中測量，無需純化
- 無需標記測量
- 極低的樣品消耗量
- 直接在脂質體或者去污劑中研究膜蛋白
- 可以在各種不同的溶液環(huán)境中完成測量，包括研究膜蛋白所需的復雜的去污劑環(huán)境
- 研究化學計量學并確定生物分子結合位點的數目
- 研快速簡單的實驗準備
測量數據方面：
- 10分鐘之內測量任何（生物）分子間親和力(KD, 解離常數)
- 測量sub-nM到mM 級的解離常數
- 可以選擇特定溫度下完成測量
- 研究各種不同大小的分子：離子、片段、核小體、脂質體
- 廣泛的樣品兼容性：天然的環(huán)境中、生理學實驗條件、血清、細胞裂解液
- 可以研究多組分反應：三元復合物、裝配順序、干擾因素、協(xié)同作用、類似物
- 可以區(qū)分靶標上不同的結合位點
- 可以測量生物分子的寡聚化
- 研究結合能量學ΔG (自由能 ), ΔH (焓) 和ΔS (熵)
- 研究蛋白的折疊和穩(wěn)定性
實驗操作方面：
- 非常簡單易操作
- 實時獲得數據
- 非常穩(wěn)定的技術
維護費用方面：
- 非常低的運行成本
- 不需要日常的儀器維護
- 更快得到數據用于發(fā)表文章
- 儀器小型化設計，占用空間少
