【適用范圍及性能】
玉米赤霉烯酮免疫親和柱適用于糧食及糧食制品、食品、飼料等樣本中的ZEN凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。
柱容量:≥1500ng
【試驗原理】
玉米赤霉烯酮免疫親和柱基于抗原抗體特異性反應(yīng),將玉米赤霉烯酮抗體偶聯(lián)與柱內(nèi)凝膠上,樣品提取液通過免疫親和柱時,提取液內(nèi)待測毒素(抗原)與抗體特異性結(jié)合,形成抗體抗原復(fù)合物保留在柱內(nèi)凝膠上,洗滌出去雜質(zhì),用郵寄溶劑解離復(fù)合物,洗脫純凈待測毒素用于分析檢測。
【結(jié)果判定】
經(jīng)玉米赤霉烯酮免疫親和柱凈化后,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。收集到的1ml洗脫液中的玉米赤霉烯酮含量相當(dāng)于1g樣品中玉米赤霉烯酮含量。
玉米赤霉烯酮親和柱凈化過程
----3mL柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下突出部分,插回柱子上(1mL柱管上方堵頭取出后斜 剪斷,然后再插回柱子上),另一端與20mL針筒固定后使用;
----準(zhǔn)確移取上述混勻濾液,注入針筒中,調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;
----用20mL 水沖洗柱子,流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內(nèi)沒有殘余 液體;
----準(zhǔn)確加入2mL甲醇(色譜級)洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內(nèi)沒有 殘余液體。收集全部洗脫液;
----過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,進行HPLC測定;或用氮氣吹干,經(jīng)流動相復(fù)溶,過有機濾膜 (孔徑0.22μm)后,參照GB 5009.209-2016或GB/T 28716-2012條件進行HPLC測定。
玉米赤霉烯酮親和柱凈化過程注意事項
1. 親和柱使用前,需要提前平衡30min至室溫;
2. 親和柱與20mL針筒連接時,一定旋緊20mL針筒與堵頭連接處,防止上樣過程漏液;
3. 采用大量程移液器準(zhǔn)確移取混勻濾液進行上樣;樣液流過柱體的速度不能過快,采用固相萃取架過柱 時可以調(diào)節(jié)流速為2秒/滴,若無此設(shè)備,自然重力流速也可;
4. 沖洗柱子時保持自然重力流速即可;對于醬油、醋、油類、玉米加工副產(chǎn)物及飼料等顏色較深的樣品, 可以先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水沖洗,后用10mL水沖洗柱子;
5. 柱子沖洗過后一定要用洗耳球吹干柱子內(nèi)殘余的液體,但不能讓柱子干燥時間過長,要立即加入洗脫 液;
6. 采用玻璃移液管準(zhǔn)確移取2mL色譜級甲醇進行洗脫,自然重力流速即可(不可施壓),后一定要用 洗耳球吹干柱子內(nèi)殘余的甲醇,收集全部洗脫液;
7. 洗脫液必需先經(jīng)過0.22μm濾膜過濾才能進行HPLC測定;
8. HPLC測定值接近zui高檢出值時,樣本實際含量可能大于柱容量而造成流穿,需減少上樣體積。