產(chǎn)品名稱：HAL-01人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 含str鑒定
1） 來源：淋巴癌
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
售后：收到細(xì)胞后12天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員，我們將盡快為您解決！
上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購(gòu)。。。。。。
產(chǎn)品名稱：HAL-01人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 含str鑒定
1） 來源：管癌
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
售后：收到細(xì)胞后12天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員，我們將盡快為您解決！
注：耐藥細(xì)胞培yang操作流程和普通細(xì)胞培yang方法基本*，只是在培yang中會(huì)加藥維持篩選壓力
- HAL-01人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 含str鑒定
- 三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：
- 組成：
組份 | 數(shù)目 |
細(xì)胞 | 1 T-25瓶 |
細(xì)胞說明書 | 一份 |
- 細(xì)胞簡(jiǎn)介：
生長(zhǎng)特性： | 貼壁生長(zhǎng)
|
細(xì)胞來源： | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn) |
培yang條件： | 培yang基：F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS（*德國(guó)SERANA S-FBS-SA-015優(yōu)等胎牛血清） 氣相：空氣95%，二氧化碳5% 溫度：37℃ |
培yang： |
1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，將其平躺置于培yang箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，將其中的培yang液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培yang基并置于細(xì)胞培yang箱中培yang，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培yang基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代； 2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，*次傳代比例為1:2。 3傳代步驟：將0.25%含EDTA*置于37°預(yù)熱，倒掉培yang瓶中的培yang基，往培yang瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的*，置于37°孵育消化（*次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時(shí)間，記錄zui佳消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培yang基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培yang基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。
二、懸浮細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清； 2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培yang基，然后將其置于細(xì)胞培yang箱中培yang，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培yang基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液（離心后去舊液，加入新鮮培yang基）； 3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí)，對(duì)其進(jìn)行傳代，*次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培yang）。
|
細(xì)胞總數(shù)： | 1~3*106 |
傳代周期： | 2-3天 |
傳代比例： | 1:2~1:4 |
換液頻率： | 2-3天 |
凍存液： | 90%FBS+10%DMSO |
做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的同學(xué)看過來。
選擇上海琛藝生物細(xì)胞有3個(gè)理由：
1、細(xì)胞狀態(tài)好，形態(tài)佳，易成活，是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;
2、物流迅速，復(fù)蘇好后發(fā)貨，次日就能到;
3、使用我司*的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培yang實(shí)驗(yàn)，效果更佳。
專業(yè)技術(shù)人員萬工收藏的細(xì)胞培yang小技巧:
1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買，比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹，這樣培yang之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、傳代、培yang基的類型等。
2. 不管是買的細(xì)胞，還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測(cè)是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培yang基。
3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢，可以買個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下。
4. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同。有的生長(zhǎng)很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿。這就需要要在培yang細(xì)胞的過程中多多摸索。
5. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)。*消化不能過久，吹得時(shí)候要輕柔，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培yang基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。記住，是每天。
細(xì)胞培yang常見問題及解決方法
問題 | 原因 | 解決方案 |
細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢 | 生長(zhǎng)培yang基使用不當(dāng) | 按照生產(chǎn)商的建議，使用相應(yīng)的預(yù)熱生長(zhǎng)培yang基。 |
生長(zhǎng)培yang基中血清質(zhì)量差 | 使用其他批次血清。 | |
傳代操作不當(dāng) | 按照生產(chǎn)商的建議消化時(shí)間及傳代比例進(jìn)行操作。 | |
換液過于頻繁 | 降低換液頻率，參考生產(chǎn)商*的換液頻率。 | |
細(xì)胞傳代次數(shù)過多 | 使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。 | |
細(xì)胞生長(zhǎng)超過匯合狀態(tài) | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行，建議細(xì)胞密度達(dá) 80-90%傳代。 | |
細(xì)胞被支原體污染 | 將細(xì)胞、培yang基和試劑丟棄；新取一只凍存細(xì)胞，并且使用新的培yang基和試劑。 | |
細(xì)胞復(fù)蘇存活率低 | 細(xì)胞凍存不當(dāng) | 新取一只凍存細(xì)胞，并儲(chǔ)存在液氮中。將細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中，直至復(fù)蘇。 |
自行制備的凍存細(xì)胞無活性 | 將細(xì)胞按照生產(chǎn)商*的密度凍存。 | |
制備凍存細(xì)胞時(shí)使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞。 | ||
嚴(yán)格按照生產(chǎn)商*的操作程序凍存細(xì)胞。請(qǐng)注意本手冊(cè)*的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。 | ||
新取一只凍存細(xì)胞。 | ||
細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng) | 嚴(yán)格按照生產(chǎn)商*的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請(qǐng)注意本手冊(cè)*的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。 | |
確保冷凍細(xì)胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長(zhǎng)培yang基緩慢稀釋細(xì)胞。 | ||
復(fù)蘇培yang基使用不當(dāng) | 使用生產(chǎn)商*的培yang基。確保培yang基使用前已經(jīng)預(yù)熱。 | |
細(xì)胞稀釋過度 | 按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細(xì)胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。 | |
處理細(xì)胞時(shí)動(dòng)作不夠輕柔 | 凍存和復(fù)蘇過程對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培yang瓶的方法使細(xì)胞脫落(培yang昆蟲細(xì)胞時(shí)除外)，也不要高速離心細(xì)胞。 | |
凍存液中所用保護(hù)劑在儲(chǔ)存過程中未避光 | 如果未避光儲(chǔ)存，凍存保護(hù)劑會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)細(xì)胞有毒性的物質(zhì)；新取一只凍存保護(hù)劑，重新凍存細(xì)胞。 |
★由于細(xì)胞庫(kù)現(xiàn)有細(xì)胞類目多，為了不出現(xiàn)混亂錯(cuò)誤，需要了解相關(guān)細(xì)胞價(jià)格及詳細(xì)資料直接call，對(duì)您造成的不便還請(qǐng)見諒！
★注：如運(yùn)輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補(bǔ)發(fā)
收貨后十個(gè)工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價(jià)重發(fā)
后，通過低溫保藏儲(chǔ)備一些細(xì)胞，以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象，或常規(guī)檢測(cè)呈陽性結(jié)果，那么較可靠的補(bǔ)救措施是扔掉所有培yang物，清潔培yang箱和超凈臺(tái)，一切從頭開始。當(dāng)然，你得確保儲(chǔ)備的細(xì)胞是不含支原體的。
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