產(chǎn)品名稱：HepG2-LUC人肝癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞來(lái)源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸
售后：收到細(xì)胞后12天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員，我們將盡快為您解決！
上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株，其中人的已通過(guò)STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購(gòu)。。。。。。
細(xì)胞名稱：HepG2-LUC人肝癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形 態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣
“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時(shí)期，稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生*)，適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。
formazan結(jié)晶的生成量?jī)H與活細(xì)胞數(shù)目成正比（死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來(lái)溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來(lái)避光，覺(jué)得這樣比較好。
目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由冰晶形成的細(xì)胞損傷。
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細(xì)胞凍存。
2、取對(duì)數(shù)生*的細(xì)胞，用*把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)，懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中。
3、離心1000 rpm,5 min。
4、去除*及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的zui終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者。
6、凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)到-25℃以下時(shí)，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000－10000個(gè)接種到96孔板，每孔體積200ul.
2細(xì)胞培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）。
3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對(duì)于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。
HepG2-LUC人肝癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
- 組成：
組份 | 數(shù)目 |
細(xì)胞 | 1 T-25瓶 |
細(xì)胞說(shuō)明書(shū) | 一份 |
- 細(xì)胞簡(jiǎn)介：
生長(zhǎng)特性： | 貼壁生長(zhǎng)
|
細(xì)胞來(lái)源： | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn) |
培養(yǎng)條件： | 培養(yǎng)基：F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS（*德國(guó)SERANA S-FBS-SA-015優(yōu)等胎牛血清） 氣相：空氣95%，二氧化碳5% 溫度：37℃ |
培養(yǎng)： |
1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無(wú)菌操作臺(tái)，打開(kāi)瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培育，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代； 2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，*次傳代比例為1:2。 3傳代步驟：將0.25%含EDTA*置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的*，置于37°孵育消化（*次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為*消化時(shí)間，記錄*消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。
二、懸浮細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，然后置于無(wú)菌操作臺(tái)，打開(kāi)瓶口，輕輕吹打后，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清； 2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培育，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）； 3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí)，對(duì)其進(jìn)行傳代，*次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。
|
細(xì)胞總數(shù)： | 1~3*106 |
傳代周期： | 2-3天 |
傳代比例： | 1:2~1:4 |
換液頻率： | 2-3天 |
凍存液： | 90%FBS+10%DMSO |
三、如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。
更多細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)如下
1培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒(méi)有影響？
答：一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。
11.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？
答：除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞)，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)方瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。
12.冷凍管應(yīng)如何解凍？
答：取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2 分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞，用75％消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂
13.如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞？
答：將樣品適當(dāng)稀釋后，用稀釋后的樣品和0.4％的臺(tái)盼蘭溶液按1:1混合后，用移液槍點(diǎn)樣到血球計(jì)數(shù)板，置于倒置顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，其中藍(lán)色細(xì)胞是死細(xì)胞，因活細(xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，不被染色。
14.細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？
答：冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1-8×106 cells/ml vial。
15.細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？
答：動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)較常使用的冷凍培養(yǎng)基是含9 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中，必須使用前先行配制完成。
