組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
登革病毒2型檢測試劑盒（熒光PCR法） | 50T | YS-P013981 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
雞免疫球蛋白G Fc段低親和力受體IIIa(FcγR3A) Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgM
雞尿游離皮質(zhì)(UFC) Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgM
雞非受體酪氨酸激酶2(TNK2) Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgM
雞結(jié)蛋白(Des) PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgM
雞前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9) PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgM
雞羧肽酶E(CPE)Cy3標(biāo)記的羊抗人IgM
雞黑素瘤黏附分子(MCAM)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgM
雞骨保護(hù)素配體(OPGL)辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgM
雞X型膠原(COL10)辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞胃蛋白酶原A(PGA)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞神經(jīng)絲蛋白(NF)羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞凝血因子Ⅸ(F9)FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞孕激素相關(guān)內(nèi)膜蛋白(PAEP) 膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞分泌粒蛋白II (SCG2)PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞前膠原C端肽酶(PCP) PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG
雞殺菌性/通透性增加蛋白(BPI) Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgG
登革病毒2型檢測試劑盒（熒光PCR法）V5 tag/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記V5 tag標(biāo)簽抗體IgGFmoc-4-氨-L-氨酸 98%
V.cholera Ogawa/FITC 熒光素標(biāo)記01群小川型霍亂弧菌抗體IgGN-(9-芴氧羰酰)-D-3-氯氨酸 98%
VCP/p97 /FITC 熒光素標(biāo)記抗含纈酪肽蛋白抗體IgGN-芴氧羰-L-4-氯氨酸 98%
V.cholera Ogawa/Biotin 生物素化01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgGFMOC-D-4-氯氨酸 98%
V.cholera Ogawa/Biotin 生物素化01群小川型霍亂弧菌抗體IgGL-4-氟氨酸鹽酸鹽 97%
Influenza A Virus H1/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗季節(jié)性A型流感病H1抗體IgG4-氟-D-氨酸鹽酸鹽 99%
Influenza A Virus H3/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗季節(jié)性流感病H3抗體IgGFMOC-L-4-氟氨酸 98%
H1N1-A/HRP(Influenza A virus)California 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗季節(jié)性A型人流感病H1N1抗體IgG(美國加州型)Z-4-Fluoro-Phe-OH 98%
