組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
pCaMV35S基因檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/strong> | 48T 0.1PCR管 | YS-P014134 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
人10kDa干擾素γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10/CXCL10)兔子堿性成纖維生長(zhǎng)因子
人質(zhì)衍生因子1(SDF-1)人結(jié)締組織活化肽Ⅲ
人趨化因子CXC配體16(CXCL16)大鼠白介素7
人胱抑素C(Cys-C)人巨噬集落激因子受體
人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)兔子前列腺素E2
人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)魚(yú)促卵泡素
人內(nèi)皮素1(ET-1)小鼠β-防御素
人促紅生成素(EPO)凋亡原位檢測(cè)試劑盒（我公司提供代測(cè)服務(wù)）
人胎蛋白(αFP) 大鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶
人酸性成纖維生長(zhǎng)因子(AFGF/FGF1)魚(yú)促黃體激素
人鐵調(diào)素(Hepc)小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧末端肽
人粒集落激因子(G-CSF)人免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ
人肝生長(zhǎng)因子(HGF) 兔子5羥色
人β干擾素(IFN-β)兔子β內(nèi)啡肽
人胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1) 小鼠神經(jīng)絲蛋白
人白介素1α(IL-1α)魚(yú)磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶
pCaMV35S基因檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/strong>phospho-HP1/heterochromatin protein 1 (pTyr24)(fruit fly) 異染色質(zhì)蛋白1(磷酸化多肽)2,6-二叔丁-4-吡啶 98%
phospho-heterochromatin protein 1 (pTyr41)peptide 異染色質(zhì)蛋白1（磷酸化多肽）酮膦酸二酯 96%
HPV16-E6/E6 protein(Human papillomavirus type 16) 人類(lèi)狀瘤病16抗原1,4-二氯酞 98%
HPV18 E6 人類(lèi)狀瘤病18抗原2,2'-聯(lián)吡啶 AR,99.0%
HPV16-E7/E7 protein(Human papillomavirus type 16) 人類(lèi)狀瘤病16抗原戴斯-馬丁試劑 96%
Hpt/HP(haptoglobin) 結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗原二氨三氟化硫 95%
H-ras/Ras/Ras p21 peptide 原癌因H-ras抗原1-癸炔 98%
HSTF2/HSF2 peptide 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗原氫化奎寧 1,4-(2,3-二氮雜萘)二 95%
