細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 胚肺成纖維細胞：IMR-90 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0530 |
商品介紹：
名稱 胚肺成纖維細胞：IMR-90 別稱IMR 90; IMR90; Institute for Medical Research-90; I90 種屬人類 年齡（性別）女性，16周齡 組織來源肺 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述IMR-90細胞是由W·W·Nichols及其同事從一位16周女嬰的肺中取材建立的人二倍體成纖維細胞株。分裂潛能、病毒感受性和其它性質(zhì)都得到了充分研究，因而這株細胞可以作為WI-38或其它標準人肺細胞株的替代株。有報道稱，IMR-90細胞在表現(xiàn)出衰老前可倍增58次。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項該細胞為有限傳代細胞系，請注意代次控制。 |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) HA 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 KLK-4 / Kallikrein-4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 IL-17F /
胚肺成纖維細胞：IMR-90 RanBP2 RAN結(jié)合蛋白2/核孔蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
FAP1/PTPN13 Fas相關(guān)磷酸1/蛋白磷酸非受體型13抗體 規(guī)格: 0.2ml
1瓶 Calu-3細胞株 Calu-3 低溫運輸和保存
CGR19 細胞生調(diào)控蛋白19抗體（環(huán)指蛋白197） 規(guī)格: 0.2ml
2 ug pSEP3 pSEP3 低溫運輸，-20℃保存
2500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH8.0 Tricine Buffered Saline,5X,pH8.0 常溫保存
100g 預混型丙烯酰胺-甲叉雙丙烯干粉（19:1） Premixed Acr-Bis Powder 避光干燥保存
1套 糖蛋白PAGE染液
含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE）顆粒 300ml*10
1g G 鈉鹽 Penicillin G Sodium Salt 室溫保存
2 ug pINIIIompA pINIIIompA 低溫運輸，-20℃保存
MYBPC1 肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體 規(guī)格: 0.2mlSAHH S苷L-同型半水解 規(guī)格: 0.2ml
