組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
單增李斯特菌核酸檢測試劑盒優(yōu)點:①靈敏度高、特異性強(qiáng)。
②時間短,2-3小時出結(jié)果。
③檢測結(jié)果可定量。
④操作簡便。
缺點:①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗證)
②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。
【質(zhì)量控制】
1.陰性對照:Ct 值>38 或未檢出。
2.陽性對照:擴(kuò)增曲線呈 S 型,且 Ct 值≤30。
3.同一實驗以上要求需同時滿足,否則本次實驗視為無效。
4.每種檢測靶標(biāo)都需設(shè)陰陽對照,不同的靶標(biāo)根據(jù)對應(yīng)陰性調(diào)整基線閾值。
【結(jié)果判讀】
1.FAM 通道檢測 B 組鏈球菌。
2.陰性:Ct 值>38 或未檢出。
3.陽性:擴(kuò)增曲線呈 S 型,且 Ct 值≤35。
4.可疑:擴(kuò)增曲線呈 S 型,且 35<Ct 值≤38,需復(fù)檢;復(fù)檢結(jié)果若一致,判定結(jié)果為陽性。
【檢驗方法的局限性】
1.樣品采集、運(yùn)輸、保存不當(dāng),試劑運(yùn)輸、保存、配置不當(dāng)都可能會影響實驗結(jié)果,甚至?xí)?dǎo)致假陰性結(jié)果。
2.如果實驗室污染、試劑污染、樣品交叉污染,可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
公司正在出售的產(chǎn)品:
G蛋白偶聯(lián)受體83封閉多肽 | 酯化梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒 |
芹菜源性成分PCR試劑盒 | EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成mei抗體ELISA試劑盒 |
大鼠環(huán)磷suan腺苷(cAMP)ELISA試劑盒 | Cullin3蛋白ELISA試劑盒 |
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人黑色su細(xì)胞刺激su(MSH)elisa試劑盒 | CopineⅡ蛋白ELISA試劑盒 |
人轉(zhuǎn)錄因子E2F1 試劑盒ELISA | 氧化meiⅥα亞基多肽1ELISA試劑盒 |
LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1封閉多肽 | 流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒 |
轉(zhuǎn)錄因子LBX1封閉多肽 | 札如病毒型PCR檢測試劑盒 |
1號染色體開放閱讀框33封閉多肽 | 東部馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒 |
轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SC24C封閉多肽 | 梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒 |
2,4-二氯苯氧乙聯(lián)牛血清白蛋白偶聯(lián)物 | 產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒 |
過氧化物mei8封閉多肽 | 著色霉PCR試劑盒 |
鋅指蛋白387封閉多肽 | 單增李斯特菌核酸檢測試劑盒乙型肝炎病毒前基因組RNA RT-PCR試劑盒 |
促腎上腺皮質(zhì)激su(1-39)封閉多肽 | 腸出血性大腸桿菌O104:H4血清型PCR試劑盒 |
磷suan化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨suan激mei封閉多肽 | 產(chǎn)氣克雷伯氏菌PCR檢測試劑盒 |