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流式細(xì)胞術(shù)抗體特異性常見的驗(yàn)證方法

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2024年12月24日 13:23  

常見的流式細(xì)胞術(shù)抗體特異性驗(yàn)證方法:

1、免疫熒光染色共定位:使用該抗體與已知針對同一細(xì)胞結(jié)構(gòu)或分子但標(biāo)記不同熒光素的另一種抗體同時(shí)進(jìn)行染色。通過觀察兩種熒光信號(hào)的共定位情況,如果高度重合,說明該抗體具有較好的特異性。

2、競爭抑制實(shí)驗(yàn):在抗體染色前,先加入過量的未標(biāo)記的相同抗原,然后再加入標(biāo)記的抗體進(jìn)行染色。如果特異性高,過量的未標(biāo)記抗原會(huì)競爭結(jié)合位點(diǎn),導(dǎo)致標(biāo)記抗體的結(jié)合減少,熒光信號(hào)降低。

3、敲除或沉默基因驗(yàn)證:對于檢測特定基因表達(dá)產(chǎn)物的抗體,如果有條件,可以在細(xì)胞中敲除或沉默相應(yīng)的基因,然后用該抗體進(jìn)行染色。如果基因敲除或沉默后抗體檢測不到信號(hào)或信號(hào)顯著降低,說明抗體特異性良好。

4、抗原親和純化:利用固定有相關(guān)抗原的親和層析柱來純化抗體,如果純化后的抗體在后續(xù)的流式細(xì)胞術(shù)檢測中表現(xiàn)出與預(yù)期一致的特異性結(jié)合,可證明其特異性。

5、細(xì)胞分群驗(yàn)證:對于已知在不同細(xì)胞亞群中有特異性表達(dá)或差異表達(dá)的抗原,檢測該抗體在這些細(xì)胞亞群中的染色情況是否符合預(yù)期,來判斷其特異性。

6、抗體稀釋實(shí)驗(yàn):逐步稀釋抗體,觀察熒光信號(hào)的變化。如果在一定稀釋范圍內(nèi),信號(hào)強(qiáng)度與抗體濃度呈線性關(guān)系,且在低濃度時(shí)仍能特異性結(jié)合,說明抗體特異性較好。

7、檢測不同物種細(xì)胞:如果抗體是針對保守的抗原表位,檢測不同物種來源但具有相同抗原的細(xì)胞,觀察抗體結(jié)合情況是否一致,來評估其特異性。



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