GUS基因核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/strong>【儲(chǔ)存條件及有效期】
1．避光-20℃儲(chǔ)存，有效期 12 個(gè)月。
2．低溫運(yùn)輸不能超過(guò) 4 天；開(kāi)封后避光-20℃儲(chǔ)存，對(duì)有效期沒(méi)有影響。避免反復(fù)凍融，凍融 6 次不影響檢測(cè)效果。
3．生產(chǎn)日期、有效期至：見(jiàn)外包裝盒。
【適用儀器】
適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動(dòng)熒光PCR 檢測(cè)儀。
【樣本要求】
1．樣本種類(lèi)：鼻/咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液；培養(yǎng)物等樣品。
2．保存條件：采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送檢，24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的應(yīng) 4℃保存，超過(guò) 24 小時(shí)的最好-70℃保存，并避免反復(fù)凍融。
【檢測(cè)方法】
1 ． 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
將試劑盒各組分置 4℃避光融化，充分混勻后瞬間離心。計(jì)算試劑使用份數(shù) N（N=樣本數(shù)+1 管陽(yáng)性對(duì)照+1 管陰性對(duì)照），根據(jù)下表配置反應(yīng)體系mix，加入一適當(dāng)體積離心管中，充分混勻后瞬間離心，按 20μL 分裝至 PCR 反應(yīng)管/板，并轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
【結(jié)果分析條件設(shè)定】：
u 基線(xiàn)（Baseline）設(shè)定：應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號(hào)無(wú)較大波動(dòng)），起始點(diǎn)（Start）應(yīng)避開(kāi)熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng)，終止點(diǎn)（End）應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán)，建議基線(xiàn)設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線(xiàn)設(shè)定在剛好超過(guò)正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線(xiàn)的最高點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】：
1. 陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性，無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無(wú)Ct；
2. 陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小于等于35；
3. 以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿(mǎn)足，否則該次實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
【結(jié)果判斷】：
1. 陽(yáng)性：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且38≤Ct<40，此時(shí)樣本為可疑樣本；對(duì)于可疑樣本建議復(fù)核一次，若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期，則判定為陽(yáng)性，否則判定為陰性；
3. 陰性：無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無(wú)Ct值均判定為陰性樣本。
【注意事項(xiàng)】：
1．PCR 操作各階段應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作，避免交叉污染。
2．試劑盒各組分使用前應(yīng)充分融化混勻，離心數(shù)秒后使用。
3．各組分不得與其他產(chǎn)品或不同批號(hào)的相應(yīng)成分進(jìn)行互換。
4．待測(cè)標(biāo)本若不及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)保存于-20℃或-70℃。
5．樣品的處理應(yīng)該嚴(yán)格按照生物安全規(guī)范操作。
6．PCR 操作人員應(yīng)具有經(jīng)驗(yàn)和受過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)。
7．本試劑盒僅用于科研使用，不做為臨床診斷使用。
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