Sphingobiumamiense品牌低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長(zhǎng)期保存。
基本信息:
資源名稱 Sphingobiumamiense品牌
種屬:Sphingobiumamiense
分離基物 河流沉積物
安全等級(jí) 1
模式菌株 yes
應(yīng)用領(lǐng)域 模式菌株。降解壬基苯酚
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基 2
生長(zhǎng)條件 30℃
脫水存法:
①Sphingobiumamiense品牌沙土保存法,能產(chǎn)孢子的細(xì)菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合,經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2~3次,烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的孢子,用無(wú)菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液,吸取少許加入沙土管中,經(jīng)真空抽干,外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存,保存期可達(dá)5~7年。
② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合,放在安瓿管內(nèi)于-20~-30℃的乙醇浴中速凍。然后,在低溫下用真空泵抽干,并用五氧化二磷或干冰使水汽結(jié)凍,熔封安瓿管,于低溫下保存。保存期可達(dá)5~10年之久。
③ 石蠟油封存法,在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低溫干燥處保存,此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物,保存期為一年以上。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈Sphingobiumamiense品牌孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱為四級(jí)發(fā)酵。
注意事項(xiàng):
1、Sphingobiumamiense品牌忌與殺菌的化學(xué)農(nóng)藥一并使用,使用過(guò)的殺菌劑或者噴霧器需要*清洗后才能使用。
2、包裝開(kāi)啟后請(qǐng)一次性用完,未用完應(yīng)密封,并放置于陰涼、干燥的環(huán)境里保存。
3、貯存方法:在密封、陰涼、干燥之處保存
A549/DDP細(xì)胞株pBAD432 ug
A549/Taxol細(xì)胞株pBADZ-His6Cre2 ug
A549細(xì)胞株pBAsi-mU62 ug
A-673細(xì)胞株pBBR1-MCS22 ug
A7d細(xì)胞株pBBR1-MCS32 ug
A7r5細(xì)胞株pBBR1-MCS42 ug
A-875細(xì)胞株pBBR1-MCS52 ug
A9細(xì)胞株pBBR1-MCS-62 ug
AAV-293細(xì)胞株pBBR1Tp2 ug
Acc-2細(xì)胞株pBBR22b2 ug
ACHN細(xì)胞株pBC12 ug
AE-1細(xì)胞株pBC-Hygro2 ug
AE-2細(xì)胞株pBC-SK2 ug
AGS(GFP)細(xì)胞株pBD-NF-κB2 ug
AGS細(xì)胞株pBD-p532 ug
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)葡萄球菌選擇性瓊脂110(CHAPMAN 瓊脂)用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)Staphylococcus Selective Agar 10 250
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)甘露醇卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)(Japan方法)Egg-Yolk Mannitol Salt agar Base250
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)V-J瓊脂病源標(biāo)本和其它標(biāo)本中甘露醇陽(yáng)性金黃色葡萄球菌的選擇性分離(Merck方法)Vogel-Johnson Agar250
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)改良Giolitti-Cantobi 肉湯用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)Modified Giolitti-Cantoni Broth250
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)甘露醇高鹽瓊脂 用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)Manitol Salt Agar250
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TMP瓊脂培養(yǎng)基用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)TMP Agar 250
Sphingobiumamiense品牌MH瓊脂(MHA) 250(g)
Antibiotic agar N2 GROVE and RANDALL medium2 抗生素瓊脂12號(hào) 1.10672.0500MERCK默克
Columbia agar base 哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ) 1.10455.0500MERCK默克
雙糖鐵瓊脂
Nutrient broth 營(yíng)養(yǎng)瓊脂 1.05443.0500MERCK默克
Standard nutrient agar標(biāo)準(zhǔn)I營(yíng)養(yǎng)瓊脂 1.07881.0500MERCK默克
PALCAM Medium Base